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重組蛋白真核表達(dá)系統(tǒng)對(duì)蛋白質(zhì)表達(dá)有決定性影響的因素是什么？
重組蛋白真核表達(dá)包括酵母表達(dá)系統(tǒng)、桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)、腺病毒表達(dá)系統(tǒng)等。一般能正確折疊，含有各種修飾。但價(jià)格高，周期長(zhǎng)。基因表達(dá)是指細(xì)胞把儲(chǔ)存在DNA序列中遺傳信息經(jīng)過轉(zhuǎn)錄和翻譯，最終轉(zhuǎn)變成具有生物活性的蛋白質(zhì)分子。
重組蛋白的應(yīng)用用于結(jié)構(gòu)研究時(shí)，重組蛋白的表達(dá)要求正確的蛋白質(zhì)折疊、形成正確的二硫鍵、均一的重組產(chǎn)物。每種表達(dá)系統(tǒng)的蛋白質(zhì)折疊和二硫鍵形成的內(nèi)在能力。不均一性的潛在來源包括鱗酸化、甲硫氣酸氣膚酶對(duì)起始甲硫氨酸的低效切割以及糖基化。不幸的是, 不均一的磷酸化常見于重組蛋白激酶的表達(dá),并且每一種表達(dá)宿主都有類似報(bào)道。在這種情況下, 可以通過磷酸酶處理去除重組蛋白上的磷酸基團(tuán)以獲得均一性。當(dāng)重組蛋白在胞內(nèi)表達(dá)時(shí)，可能會(huì)出現(xiàn) N 端甲硫氨酸的不均一性。原核生物和真核生物都含有甲硫氨酸氨肽酶，甲硫氨酸的切割效率受起始甲硫氨酸相鄰的氨基酸的影響。
重組蛋白真核表達(dá)與表達(dá)該蛋白質(zhì)的基因序列有直接關(guān)系，基因序列以及相應(yīng)的mRNA序列對(duì)蛋白質(zhì)表達(dá)有決定性影響?；蛐蛄性O(shè)計(jì)和優(yōu)化可顯著提高蛋白質(zhì)表達(dá)量，甚至讓不可溶表達(dá)的蛋白質(zhì)實(shí)現(xiàn)可溶表達(dá)。 表達(dá)蛋白的生物體也稱為宿主細(xì)胞。通常用來表達(dá)蛋白的宿主細(xì)胞包括細(xì)菌、酵母、昆蟲、植物、動(dòng)物細(xì)胞和無細(xì)胞表達(dá)體系等。由于各種生物的特性不同，適合表達(dá)蛋白的種類各不相同，同一種蛋白在不同宿主中的表達(dá)效率也存在很大差別。 在各種表達(dá)系統(tǒng)中，普遍的是大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)，也是目前掌握尤為成熟的表達(dá)系統(tǒng)，大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)以其細(xì)胞繁殖快速產(chǎn)量高、誘導(dǎo)表達(dá)相對(duì)簡(jiǎn)便等優(yōu)點(diǎn)成為生產(chǎn)重組蛋白的常用的系統(tǒng)。
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