AMPPD發(fā)光顯色試劑盒

產(chǎn)品貨號(hào)：T15115

產(chǎn)品規(guī)格：25T/50T

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

AMPPD是堿性磷酸酶的化學(xué)發(fā)光底物，在適宜的緩沖液中，隨著酶的催化水解作用，AMPPD分解成AMP-D，后者發(fā)出強(qiáng)度很高的光信號(hào)，其發(fā)光的速度取決于堿磷酶的濃度。當(dāng)堿磷酶偶合到雜交的探針時(shí)，便可以通過(guò)此系統(tǒng)檢測(cè)到雜交分子的存在量。乙醇胺可使光信號(hào)輸出更理想。AMPPD為1，2-二氧環(huán)已烷衍生物，它是一種生物化學(xué)領(lǐng)域中新的超靈敏的堿性磷酸酶底物，其特點(diǎn)：反應(yīng)速度快，在很短時(shí)間內(nèi)提供正確可靠的結(jié)果。在它的分子結(jié)構(gòu)中有兩個(gè)重要部分，一個(gè)是聯(lián)接苯環(huán)和金剛烷的二氧四節(jié)環(huán)，它可以斷裂并發(fā)射光子；另一個(gè)是磷酸根基團(tuán)，它維持著整個(gè)分子結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定。在通常情冴下，這種化合物很穩(wěn)定。但是，結(jié)果有堿性磷酸酶存在，Dioxetane Phosphate作為酶的底物會(huì)在酶的催化一脫去磷酸根基團(tuán)，形成一個(gè)不穩(wěn)定的中間體。這個(gè)中間體隨即自行分解（二氧四節(jié)環(huán)斷裂）,同時(shí)發(fā)射光子。尚寶生物AMPPD發(fā)光顯色試劑盒適用于PVDF膜，不推薦用于硝酸纖維素膜。

產(chǎn)品組成：

自備材料：

1. 轉(zhuǎn)印了蛋白并已以抗體-酶復(fù)合物檢測(cè)過(guò)的PVDF膜。

2. Tris鹽緩沖液(TBS)。

3. 透明的塑料保鮮膜。

4. 蒸餾水。

操作步驟(僅供參考)：

1. 臨用前，取適量的A1和A2，等量混合后獲得Dioxetane Buffer。

2. 按2.5mgAMPPD溶于25ml Dioxetane Buffer, 配制0.1mg/ml AMPPD底物溶液即為AMPPD Dioxetane Buffer(發(fā)色發(fā)光顯跡液)，用于膜的染色。

3. 取適量Dioxetane Buffer洗膜兩次，每次15min。

4. 對(duì)于PVDF膜進(jìn)行的堿性磷酸酶反應(yīng), 膜置于新鮮配制的AMPPD Dioxetane Buffer作用5min。

5. 將膜移入適量的AMPPD Dioxetane Buffer中，浸泡5min(AP反應(yīng))。

6. 取出PVDF膜，滴干水分，將膜正面朝下放在一張透明的塑料保鮮膜上，向后折疊將膜包裹起來(lái)，成為不漏水的封閉體。

7. 在暗房中，將膜正面朝下放在感光膠片上，曝光數(shù)秒至數(shù)小時(shí)。

8. 如需要，在室溫下以適量的TBS洗膜15min。

9. 將膜放入AMPPD Dioxetane Buffer，條帶應(yīng)在10~30min內(nèi)出現(xiàn)。

10. 用蒸餾水洗膜，終止反應(yīng)。晾干后拍照留的記錄。

注意事項(xiàng)：

1. PVDF膜置于膠片上后，不要改變位置。

2. 曝光時(shí)間應(yīng)根據(jù)實(shí)驗(yàn)情況，自行摸索。

3. 配制好的AMPPD Dioxetane Buffer，應(yīng)避光低溫保存。

4. 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

有效期：12個(gè)月有效。