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細(xì)胞培養(yǎng)基pH值改變的原因及解決辦法
pH值升高都有哪些原因？
①隨著培養(yǎng)基開蓋時(shí)間的增長(zhǎng)，pH值會(huì)不斷升高；
---培養(yǎng)基中CO2揮發(fā)，導(dǎo)致溶液堿性升高。
②培養(yǎng)基存儲(chǔ)條件不合適；
③操作時(shí)間過(guò)長(zhǎng)。
如何解決pH值升高的問(wèn)題？
①*培養(yǎng)基盡量現(xiàn)配現(xiàn)用，2~8℃下保存一周內(nèi)使用完；
②培養(yǎng)基在2~8℃下避光保存；
③避免操作時(shí)間過(guò)長(zhǎng)。操作時(shí)間快速、減少同時(shí)進(jìn)行的實(shí)驗(yàn)數(shù)量。
pH值降低都有哪些原因？
①在細(xì)胞生長(zhǎng)過(guò)程中，產(chǎn)生細(xì)胞代謝產(chǎn)物乳酸，乳酸蓄積，pH值通常會(huì)下降；
②培養(yǎng)瓶蓋擰得過(guò)緊；
---細(xì)胞代謝產(chǎn)生的CO2無(wú)法溢出，溶解于培養(yǎng)基中導(dǎo)致酸性變強(qiáng)。
③NaHCO3緩沖系統(tǒng)緩沖能力不夠；
④細(xì)菌、酵母或真菌污染等。
如何解決pH值降低的問(wèn)題？
①及時(shí)傳代、提高傳代比例或降低血清量；
②適當(dāng)松開瓶蓋；
③增加培養(yǎng)液中NaHCO3濃度或減少培養(yǎng)箱內(nèi)CO2濃度（NaHCO3含量在2.0g/L到3.7g/L之間時(shí)，對(duì)應(yīng)的CO2濃度為5~10%）；
④若是微生物污染造成的，需及時(shí)丟棄培養(yǎng)基，并對(duì)操作、培養(yǎng)空間進(jìn)行消毒處理。
在什么情況下選擇HEPES緩沖體系呢？
在開放式培養(yǎng)條件下（非5%CO2的培養(yǎng)環(huán)境），細(xì)胞代謝產(chǎn)生的CO2迅速溢出，pH迅速升高，使用HEPES緩沖液體系，可以防止培養(yǎng)基pH值迅速變動(dòng)。
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