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拉曼光譜儀的校準與相關(guān)方法驗證
拉曼光譜儀的校準包括三個要素：初始波長（X軸）、激光波長以及強度（Y軸）。儀器廠家應(yīng)提供一種由用戶可以執(zhí)行的，對儀器相關(guān)參數(shù)校準的方法，除另有規(guī)定外，使用者應(yīng)根據(jù)儀器所提供的校準方法制定具體的SOP，并嚴格按照SOP對上述參數(shù)進行驗證。
特別需要注意，激光波長變化可影響儀器的波長精度和光度（強度）精度。即使是穩(wěn)定的激光器在使用過程中，其輸出波長也會有輕微變化。所以，激光波長必須被校正以確保拉曼位移的準確性?？梢允褂脙x器廠家提供的拉曼位移標準參考物質(zhì)進行定期校正。某些儀器可以用一種拉曼內(nèi)標物與初級光路分離，外在校準裝置通過散射輻射準確地重現(xiàn)這一光路。推薦大家使用外部參考標準對拉曼光譜儀進行校正。
拉曼光譜儀的相關(guān)方法驗證：
對拉曼方法進行驗證是必須的，至少應(yīng)考察準確度、精密度等主要指標，然而這些指標受諸多可變因素的影響，其中熒光可能是影響方法適用性的主要變量。樣品中熒光雜質(zhì)的存在*隨樣品而異。所以方法必須能適應(yīng)不同樣品體系，必須足以將雜質(zhì)的影響降到最小。
檢測器的線性必須適應(yīng)可能的信號水平范圍。熒光可能使信號基線比驗證時高，這時必須設(shè)法將熒光減弱或者使驗證的方法適應(yīng)較高的熒光水平。這一要求對方法的精密度，檢測限（LOD）和定量限（LOQ）同樣適用，因為基線噪聲的增加會對這些數(shù)值產(chǎn)生影響。
由于熒光使基線漂移可能同樣會影響定量，所以使用時同樣需要在不同的光漂白作用水平進行可接受的定量驗證。
確定激光是否對樣品造成影響。在不同激光功率和暴露時間的條件下，對樣品目視檢查和仔細審視測得的拉曼光譜測量可以確定樣品是否改變（而不是光漂白作用）。觀察到依據(jù)是譜帶的位置、峰強和譜帶寬度是否改變或者背景強度是否有明顯的變化。
影響方法精密度的因素包括樣品的位置。樣品的形態(tài)對于固體或液體都是非常重要的因素，在校正模型中必須嚴密控制或說明。樣品的制備方法或樣品試架的形狀可能影響測量靈敏度，而且該靈敏度會隨著儀器的激發(fā)光和采集光學(xué)設(shè)置的不同而不同。
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