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電光源生物顯微鏡的折射和折射率光線在均勻的各向同性介質(zhì)中，兩點之間以直線傳播，當通過不同密度介質(zhì)的透明物體時，則發(fā)生折射現(xiàn)像，這是由于光在不同介質(zhì)的傳播速度不同造成的。當與透明物面不垂直的光線由空氣射入透明物體(如玻璃)時，光線在其介面改變了方向，并和法線構成折射角。
要想測出被檢物長度，需要用到兩個工具，其中一塊裝在目鏡中，被稱為目鏡測微尺；一塊放在生物顯微鏡載物臺上，是一塊特殊的蓋玻片，可以看到在它的中間有一小的圓形區(qū)域，里面刻有很小的刻度，一般的總長度為1mm，總共100個小格，也就是每個小格之間距離為10um，它的作用是確定目鏡測微尺在生物顯微鏡觀察下每格代表的長度。
在使用時需要先把目鏡測微尺裝入目鏡筒中，具體操作為：
先把目鏡從顯微鏡上拔下來，在遠離鏡片的一端有個齒輪狀的圓形結構，把它擰開，然后把目鏡測微尺裝入其中，注意正面要放于視場光闌上，然后將其擰回去，放回目鏡就行了。有的電光源生物顯微鏡由于結構精密，不允許拆卸，需專門配有測微尺的目鏡。然后將測微臺尺放于載物臺上，調(diào)節(jié)顯微鏡焦距知道能看到臺尺清晰的刻度為止。這時調(diào)整讓兩尺子的一端在整刻度重合，然后尋找另一端在什么地方重合，數(shù)出重疊部分的格數(shù)就能算出目鏡測微尺在放大情況下的實際倍率了。
具體計算公式如下：
目鏡測微尺每格=（臺尺重疊數(shù)X10）/目尺重疊格數(shù)。
確定好目鏡測微尺每格代表的長度后移開臺尺，之后使用時就能用它確定被檢物實際長度了。由于電光源生物顯微鏡有多個物鏡，每個物鏡放大倍率不同，目鏡測微尺在不同倍率下所代表的實際長度不同，因此在切換倍率時應重新校準。
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