磁珠提取實時熒光定量PCR是指在PCR擴增反應體系中加入熒光基團,通過對擴增反應中每一個循環(huán)產物熒光信號的實時檢測,然后通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。
磁珠提取實時熒光定量PCR技術有效地解決了傳統(tǒng)定量只能終點檢測的局限,實現(xiàn)了每一輪循環(huán)均檢測一次熒光信號的強度,并記錄在電腦軟件之中,通過對每個樣品Ct值的計算,根據(jù)標準曲線獲得定量結果。
實時熒光定量PCR和普通PCR二者結果相同。都能說明生物體外的特殊DNA復制的整個過程的擴增效率和溶解溫度情況。但主要區(qū)別有以下:
1、二者應用不同
熒光定量PCR主要是用來定量分析和確定基因轉錄水平的,普通的PCR儀是做定性分析和擴增基因片段,定量PCR儀可以做普通PCR儀的工作,反之不行。
2、二者系統(tǒng)組成不同
熒光定量PCR儀比普通的PCR儀多了熒光信號采集系統(tǒng)和計算機分析處理系統(tǒng)。
3、二者反應要求不同
熒光定量PCR對擴增片段有較高的要求,一般為100-300bp,普通PCR可以擴增長點的片段。
4、二者原理不同
熒光定量PCR實時監(jiān)測與DNA結合的熒光染料激發(fā)的熒光,普通OCR通過檢測插入DNA中核算染料的量來測定PCR產物量。
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