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高速逆流色譜是一種連續(xù)高效的液—液分配色譜分離技術(shù)， 它不用任何固態(tài)的支撐物或載體。 它利用兩相溶劑體系在高速旋轉(zhuǎn)的螺旋管內(nèi)建立起一種**的單向性流體動(dòng)力學(xué)平衡，當(dāng)其中一相作為固定相，另一相作為流動(dòng)相，在連續(xù)洗脫的過(guò)程中能保留大量固定相。
由于不需要固體支撐體，物質(zhì)的分離依據(jù)其在兩相中分配系數(shù)的不同而實(shí)現(xiàn)，因而避免了因不可逆吸附而引起的樣品損失、失活、變性等，不僅使樣品能夠全部回收，回收的樣品更能反映其本來(lái)的特性，適合于天然生物活性成分的分離。而且由于被分離物質(zhì)與液態(tài)固定相之間能夠充分接觸，使得樣品的制備量大大提高，是一種理想的制備分離手段。
它相對(duì)于傳統(tǒng)的固—液柱色譜技術(shù)，具有適用范圍廣、操作靈活、高效、快速、制備量大、費(fèi)用低等優(yōu)點(diǎn)。HSCCC 技術(shù)正在發(fā)展成為一種備受關(guān)注的新型分離純化技術(shù)，已經(jīng)廣泛應(yīng)用于生物醫(yī)藥、天然產(chǎn)物、食品和化妝品等領(lǐng)域， 在天然產(chǎn)物行業(yè)中已被認(rèn)為是一種有效的分離技術(shù)；適合于中小分子類物質(zhì)的分離純化。
制備色譜儀比較常用的是制備薄層板色譜、制備離心薄層色譜、制備干柱薄層色譜三個(gè)類別。
1、 制備薄層板色譜
制備板：一般使用200X200mm的薄層色譜板，吸附劑厚度為0.5~1mm，一般不超過(guò)2m，平均1mm厚需要的硅膠量為15~20g。為了得到低成本、鋪層均勻的高質(zhì)量制備薄層板，建議使用上?？普芄镜腡D-II型全自動(dòng)制備薄層鋪板機(jī)。
點(diǎn)樣：制備薄層分離的樣品量大，一般采用條帶點(diǎn)樣、不使用圓點(diǎn)點(diǎn)樣；一般1mm厚的硅膠*大約100mg，樣品濃度不宜太稀，應(yīng)在2~10%為宜。為了得到均勻而規(guī)則的點(diǎn)樣結(jié)果，建議使用上?？普芄镜腟P-3型電動(dòng)薄層條帶點(diǎn)樣器。同時(shí)展開(kāi)劑的用量比較大，點(diǎn)樣位置要比較高
展開(kāi)：薄層色譜層析缸要充分飽和，如制備板數(shù)量較多，請(qǐng)選用上?？普芄镜闹苽浔影寮埽?/span>
顯色：一般使用紫外燈或碘蒸汽等非破壞方式顯色，或在板邊緣進(jìn)行化學(xué)試劑顯色；
回收：將檢測(cè)到的樣品連同硅膠一齊刮下，防入砂芯漏斗，使用適當(dāng)溶劑將組分洗脫，將洗脫溶劑蒸干即可。一般希望洗脫溶劑沸點(diǎn)較低，不與組分發(fā)生反應(yīng)。
制備薄層板色譜優(yōu)點(diǎn)是使用方便、便宜、節(jié)省人力，缺點(diǎn)是分離時(shí)間較長(zhǎng)。
2、 制備離心薄層色譜
與普通制備板有三個(gè)不同點(diǎn)：
首先：色譜板是圓的，是徑向色譜，分離能力優(yōu)于方板；
其次：洗脫液的流動(dòng)不靠毛細(xì)現(xiàn)象，靠離心力，減少了分離時(shí)間與脫尾，分離效能很高；
后：洗脫液是連續(xù)流動(dòng)的，可以非常容易的形成梯度，并且不需要刮下吸附層，這樣可以使色譜板可以反復(fù)使用；
所以，制備離心薄層色譜的分離效能與分離速度要遠(yuǎn)高于制備薄層板色譜，建議采用上海公司科哲公司的KH-CTLC型制備離心薄層色譜儀。
3、制備干柱薄層色譜
可以看作棒狀的薄層色譜，優(yōu)點(diǎn)是簡(jiǎn)單易行，快速經(jīng)濟(jì)、制備量大。缺點(diǎn)是必須使用可透紫外的管材，而且在收集樣品時(shí)要割斷管材，使費(fèi)用略高。上?？普芄咎峁Ｓ玫谋由V柱。本方法與真空系統(tǒng)聯(lián)用，構(gòu)成減壓真空色譜，性能會(huì)得到進(jìn)一步提升。
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