前言2-(吡咯烷-1-基)苯基-1-戊酮 (PVP)和(Naphyrone) 是作為浴鹽銷售的策劃藥物。這些藥物是吡咯戊tong的類似物。它們由于被當(dāng)作諸如 MDMA 等藥物的合法替代品而被濫用。這些化合物的使用已被注意到能夠?qū)е滦膭舆^速、高血壓、刺激、極度恐慌發(fā)作和興奮性精神錯亂。本應(yīng)用簡報描述了對全血血清、玻璃體液、尿液或組織勻漿標(biāo)本的分析方法。分析中需要樣品的最少量為 3 mL。使用液液萃取法將 2-(吡咯烷-1-基)苯基-1-戊酮 (PVP)、吡咯戊tong和 Naphyrone以及內(nèi)標(biāo)羅哌la因從堿化樣品萃取到有機溶劑中。使用乙酸乙酯復(fù)溶萃取物，然后進(jìn)樣到四極桿離子阱氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜中進(jìn)行分析。

實驗部分標(biāo)準(zhǔn)品和試劑試劑• 1-氯丁烷 (Nanograde)、乙酸乙酯、濃氨水 (NH4OH)、碳酸鈉/碳酸氫鈉緩沖液 pH = 9.8（將 100 g 碳酸鈉與 50 g 碳酸氫鈉混合于 1000 mL 去離子水中，調(diào)節(jié) pH 至 9.8）。在室溫下的穩(wěn)定期為 1 年。• 濃鹽酸、甲醇（HPLC 級）、0.1% 鹽酸的甲醇溶液（將 0.1 mL濃鹽酸稀釋于 100 mL 甲醇中。在室溫下的穩(wěn)定期為 1 年）。• Naphyrone 和吡咯戊tong儲備標(biāo)準(zhǔn)品（1 mg/mL 的甲醇溶液）購自 Cerilliant（儲存于冰箱中直至過期）。• PVP 儲備標(biāo)準(zhǔn)品購自 Cayman Chemical（10 mg 瓶裝），將所容物轉(zhuǎn)移至 10 mL 燒瓶中，用甲醇定容。在冰箱中的穩(wěn)定期為 2 年。• 羅哌ka因儲備標(biāo)準(zhǔn)品購自 Sigma (R0283)，使用甲醇將 11.9 mg標(biāo)準(zhǔn)品稀釋至 10 mL。在冰箱中的穩(wěn)定期為 2 年。•  儲備標(biāo)準(zhǔn)品購自 Cayman Chemical，50 µL 乙酸甲酯中含 5 mg 標(biāo)準(zhǔn)品（在甲醇中稀釋至 5 mL）。儲存于冰箱中可穩(wěn)定 1 年。• Naphyrone QC 儲備標(biāo)準(zhǔn)品（1 mg/mL 的甲醇溶液）購自Cerilliant。儲存于冰箱中直至過期。• 吡咯戊tong QC 儲備標(biāo)準(zhǔn)品購自 Cayman Chemical（100 µL 甲醇中含 5 mg 標(biāo)準(zhǔn)品），將所容物轉(zhuǎn)移至 5 mL 燒瓶中，用甲醇定容。在冰箱中的穩(wěn)定期為 2 年。• PVP QC 儲備標(biāo)準(zhǔn)品購自 Cayman Chemical，10 mg 瓶裝（將所容物轉(zhuǎn)移至 10 mL 燒瓶中，用甲醇定容。在冰箱中的穩(wěn)定期為 2 年）。

工作標(biāo)準(zhǔn)品、Naphyrone、PVP 校準(zhǔn)中間標(biāo)準(zhǔn)品 15 µg/mL（將 150 µL 各儲備標(biāo)準(zhǔn)品加入 10 mL 燒瓶中，分別用甲醇定容至 10 mL）。• Naphyrone、PVP QC 中間標(biāo)準(zhǔn)品 15 µg/mL（將 150 µL 各儲備標(biāo)準(zhǔn)品加入 10 mL 燒瓶中，分別用甲醇定容至 10 mL）。• 工作內(nèi)標(biāo)物羅哌ka因 15 µg/mL（將 150 µL 儲備液加入 10 mL燒瓶中，分別用甲醇定容至 10 mL）。在 2-8 oC 下儲存。穩(wěn)定期為 1 年。

對照和校準(zhǔn)標(biāo)準(zhǔn)品陰性對照 — 來自美國紅十字會的不含藥物的全血或收集的空白尿液?；|(zhì)必須在使用前進(jìn)行檢驗并判定不含藥物。當(dāng)儲存于 -20 oC時，穩(wěn)定期為 1 年。低對照 (125 ng/mL) — 根據(jù)需要在血液或尿液中現(xiàn)配，將 25 µLQC 中間標(biāo)準(zhǔn)品加至 3 mL 空白血液或尿液中可得。高對照 (500 ng/mL) — 根據(jù)需要在血液或尿液中現(xiàn)配，將 100 µLQC 中間標(biāo)準(zhǔn)品加至 3 mL 空白血液或尿液中可得。

樣品制備使用如下工作標(biāo)準(zhǔn)品和不含藥物的血液或尿液制作校準(zhǔn)曲線：用移液管將 3 mL 樣品、陰性和陽性對照移取到帶標(biāo)記的 16 ×100 mm 培養(yǎng)管內(nèi)，加入 50 µL 工作內(nèi)標(biāo)物和 2 mL pH 9.8 的碳酸鹽緩沖液，向各管內(nèi)加入兩滴 NH4OH，輕輕渦旋至均勻。向各管內(nèi)加入 7.0 mL 1-氯丁烷，加蓋，然后旋轉(zhuǎn)所有管至少 10 min。在3,000 RPM 下將所有管離心 10 min。將有機層（頂層）移至干凈的帶標(biāo)記 16 × 100 mm 培養(yǎng)管內(nèi)。加入兩滴 0.1% 的鹽酸甲醇溶液，在 37 oC 下用氮氣蒸發(fā)至干燥。將用 200 µL 乙酸乙酯復(fù)溶干燥的萃取物轉(zhuǎn)移至具有內(nèi)插管的自動進(jìn)樣器樣品瓶，加蓋，然后轉(zhuǎn)到氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜中進(jìn)行分析。

結(jié)果與討論下列標(biāo)準(zhǔn)用于確定吡咯戊tong類似物是否存在以及其含量。• 色譜分析結(jié)果可被接受（峰分辨率、峰對稱性、不存在交叉污染）。存在可用來定量和定性的選擇性離子。來自測試標(biāo)本的假定吡咯戊tong類似物的保留時間大約在最近一次校準(zhǔn)保留時間的 ± 2% 以內(nèi)。• 使用類似物和內(nèi)標(biāo)物定量離子的面積進(jìn)行定量分析。通過比較未知物和對照物的相對響應(yīng)，并比較各校準(zhǔn)物濃度的相對響應(yīng)而產(chǎn)生的校準(zhǔn)曲線來實現(xiàn)定量。陽性對照必須處于其靶標(biāo)范圍內(nèi)，陰性對照中不能有吡咯戊tong類似物存在。• 必須觀察到適當(dāng)?shù)?m/z 離子。測試標(biāo)本和陽性對照必須在PVP、Naphyrone 和羅哌ka因內(nèi)標(biāo)各自的保留時間處表現(xiàn)出由 126 m/z 的電離所產(chǎn)生的 m/z 離子。• 使用雙離子比例法進(jìn)行鑒定。對于PVP和 Naphyrone，將 m/z 離子峰 124 和 97 的豐度除以基礎(chǔ)離子峰 84 的豐度。計算得出的離子比例處于校準(zhǔn)確定的靶標(biāo)值的 20% 以內(nèi)。

結(jié)論本應(yīng)用簡報展示了一種使用羅哌ka因作為內(nèi)標(biāo)物來測定生物樣品中吡咯戊tong類似物的靈敏且穩(wěn)定的選擇性方法。對于吡咯戊tong類似物的分析，氣相色譜四極桿離子阱串聯(lián)質(zhì)譜的優(yōu)勢不可低估。氣相色譜四極桿離子阱串聯(lián)質(zhì)譜在減少樣品基質(zhì)干擾、改善信噪比及其兼具高選擇性和靈敏性方面，為吡咯戊tong類似物的分析提供了可信度更高的解決方案。氣相色譜四極桿離子阱串聯(lián)質(zhì)譜分析具有減少假陽性和假陰性的潛力，還能在所得的結(jié)果中實現(xiàn)更高的可信度。使用上文所列的優(yōu)化方法，可將快速、靶向的氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜方法用于解決當(dāng)前法醫(yī)實驗室所面臨的吡咯戊tong類似物分析難題。聯(lián)合使用陽性對照與陰性對照可確保在未知生物樣品中進(jìn)行精確定量并排除假陰性。在多種樣品基質(zhì)中均觀察到了針對吡咯戊tong類似物低至 ng/mL 的檢測限。