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來(lái)看看基因突變檢測(cè)常見(jiàn)的檢測(cè)方法
基因突變檢測(cè)是指通過(guò)建立一系列電泳，分析DNA構(gòu)象或解鏈特性，或者利用DNA變性和復(fù)性等特性，進(jìn)行DNA突變的分析。該檢測(cè)方法對(duì)肺癌、乳腺癌、結(jié)直腸癌等腫瘤患者的早期篩查、診斷及預(yù)后具有重要意義。
常見(jiàn)檢測(cè)方法
1.焦磷酸測(cè)序法
測(cè)序法的基本原理是雙脫氧終止法，是進(jìn)行基因突變檢測(cè)的可靠方法，也是使用最多的方法。但其過(guò)程繁瑣、耗時(shí)長(zhǎng)，靈敏度不高，對(duì)環(huán)境和操作者有危害，故在臨床應(yīng)用中存在一定的限制。
2.單鏈構(gòu)象異構(gòu)多態(tài)分析技術(shù)
依據(jù)單鏈DNA在某一種非變性環(huán)境中具有其特定的第二構(gòu)象，構(gòu)象不同導(dǎo)致電泳的遷移率不同，從而將正常鏈與突變鏈分離出來(lái)。與測(cè)序法相比，靈敏性更高。
3.聚合酶鏈反應(yīng)-限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性分析技術(shù)
通過(guò)聚合酶鏈反應(yīng)擴(kuò)增出可能包含突變的基因組片段，然后利用限制性內(nèi)切酶對(duì)這些聚合酶鏈反應(yīng)片段進(jìn)行酶切，電泳檢測(cè)后根據(jù)酶切片段的長(zhǎng)度差異來(lái)判斷是否存在突變位點(diǎn)。該法一般用于基因突變檢測(cè)已知的突變位點(diǎn)。
4.探針擴(kuò)增阻滯突變系統(tǒng)
又稱等位基因特異聚合酶鏈反應(yīng)，是利用Tap DNA聚合酶缺少3′到5′外切酶活性，聚合酶鏈反應(yīng)引物的3′端末位堿基必須與其模板DNA互補(bǔ)才能有效擴(kuò)增的原理。通過(guò)設(shè)計(jì)適當(dāng)?shù)囊镆詸z測(cè)突變基因。
5.高分辨率溶解曲線分析技術(shù)
利用不同長(zhǎng)度或不同堿基組成的DNA序列溶解曲線不同的原理，在聚合酶鏈反應(yīng)后直接運(yùn)行高分辨率溶解即可完成對(duì)樣品突變分析。該技術(shù)是一種靈敏度*的表皮生長(zhǎng)因子受體基因突變篩選技術(shù)，可用于體細(xì)胞突變的檢測(cè)。
6.高效液相色譜法
該方法是基于發(fā)生錯(cuò)配的雜合雙鏈DNA與*匹配的純合雙鏈DNA解鏈特征的差異而進(jìn)行檢測(cè)的，可檢測(cè)出含有單個(gè)堿基的置換、插入或缺失的異源雙鏈片段。與測(cè)序法相比，該法簡(jiǎn)單、快速，不僅可用于已知突變的檢測(cè)，還可用于未知突變的掃描。但只能檢查有無(wú)突變，不能檢測(cè)出突變類型，結(jié)果判斷容易出錯(cuò)。
7.微數(shù)字聚合酶鏈反應(yīng)
基因突變檢測(cè)該方法為將樣品作大倍數(shù)稀釋和細(xì)分，直至每個(gè)細(xì)分試樣中所含有的待測(cè)分子數(shù)不超過(guò)1個(gè)，再將每個(gè)細(xì)分試樣同時(shí)在相同條件下聚合酶鏈反應(yīng)后，通過(guò)基因芯片逐個(gè)計(jì)數(shù)。該方法為絕對(duì)定量的方法。
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