植物總酚含量檢測試劑盒
產(chǎn)品貨號:BA1798
產(chǎn)品規(guī)格:120T
產(chǎn)品簡介:
酚類物質(zhì)是植物體中重要的次生物質(zhì),對植物生長發(fā)育有一定的調(diào)節(jié)作用,能夠清除自由基起到抗氧化的作用,并具有較高的營養(yǎng)價值和醫(yī)療保健作用,同時在植物抗病、基因的誘導(dǎo)表達和生物固氮等方面也具有重要作用,在化妝品、食品和醫(yī)藥等領(lǐng)域具有廣泛應(yīng)用。酚類物質(zhì)在堿性條件下能夠?qū)㈡u鉬酸還原生成藍色化合物,產(chǎn)物在760nm處具有特征吸收峰,通過吸光值的變化即可定量檢測植物中總酚的含量。
產(chǎn)品組成:
名稱 | 規(guī)格 | 保存條件 | 使用說明及注意事項 |
提取液 | 液體120mLx1瓶 | 4℃ | - |
試劑一 | 液體5mLx1瓶 | 4℃ 避光 | 具有刺激性,操作時請做好防護措施 |
試劑二 | 液體8mLx1瓶 | 4℃ | - |
標(biāo)準(zhǔn)品 | 粉劑x1支 (5mg沒食子酸標(biāo)準(zhǔn)品) | 4℃ 避光 | 使用前加入1mL蒸餾水充分溶解 (可50℃加熱促溶,即為5mg/mL沒食子酸標(biāo)準(zhǔn)液) |
標(biāo)準(zhǔn)稀釋液的制備:將5mg/mL沒食子酸標(biāo)準(zhǔn)液使用蒸餾水稀釋至0.3、0.2、0.1、0.05、0.025、0.0125mg/mL即為標(biāo)準(zhǔn)稀釋液。 |
序號 | A | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 |
稀釋前濃度(mg/mL) | 5.0 | 1.0 | 1.0 | 1.0 | 0.1 | 0.05 | 0.025 |
標(biāo)準(zhǔn)液體積(μL) | 100 | 150 | 100 | 50 | 200 | 200 | 200 |
蒸餾水體積(μL) | 400 | 350 | 400 | 450 | 200 | 200 | 200 |
稀釋后濃度(mg/mL) | 1.0 | 0.3 | 0.2 | 0.1 | 0.05 | 0.025 | 0.0125 |
操作步驟(僅供參考):
1. 植物總酚的提?。筛鶕?jù)預(yù)實驗結(jié)果適當(dāng)調(diào)整樣本量及比例):植物樣本烘干至恒重,粉碎后過30-50目篩;稱取約100mg粉碎樣本,加入2mL提取液,超聲提取(60℃,功率300W,超聲5s,間歇8s,總時間30min),12000rpm常溫離心10 min,取上清即為待測樣本。
2. 測定步驟:①分光光度計/酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長至760nm,蒸餾水調(diào)零。
②在96孔板或微量玻璃比色皿中依次加入下列試劑:
試劑 | 測定組(μL) | 對照組(μL) | 標(biāo)準(zhǔn)組(μL) | 空白組(μL) |
待測樣本 | 10 | 10 | - | - |
標(biāo)準(zhǔn)稀釋液 | - | - | 10 | - |
蒸餾水 | - | - | - | 10 |
試劑一 | 50 | - | 50 | 50 |
充分混勻,25℃靜置2min | ||||
試劑二 | 50 | 50 | 50 | 50 |
蒸餾水 | 90 | 140 | 90 | 90 |
充分混勻,25℃靜置10min |
吸光值測定:測定760nm處吸光值,記為A測定、A對照、A標(biāo)準(zhǔn)和A空白;計算?A測定=A測定-A對照,?A標(biāo)準(zhǔn)=A標(biāo)準(zhǔn)-A空白。注:每個測定組均需設(shè)一個對照組,空白組只需測定1-2次。
標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立:以0.3、0.2、0.1、0.05、0.025、0.0125mg/mL為橫坐標(biāo)(x),以其對應(yīng)的?A標(biāo)準(zhǔn)為縱坐標(biāo)(y),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,得到標(biāo)準(zhǔn)方程y=kx+b,將?A測定帶入公式中得到x(mg/mL)。
3. 植物總酚含量計算
①按植物樣本蛋白濃度計算
總酚含量(mg/mg prot)= x×V提取/(Cpr×V提取)=x/Cpr
②按植物樣本質(zhì)量計算
總酚含量(mg/g)=x×V提取/W=2×x/W
注釋:V提:提取液總體積,2mL;Cpr:樣本蛋白濃度,mg/mL;W:樣品質(zhì)量,g。
注意事項:
1. 若測定吸光值超出標(biāo)準(zhǔn)吸光值線性范圍,建議適當(dāng)增加樣本量或?qū)⒋郎y樣本適當(dāng)稀釋后再進行測定,計算時相應(yīng)修改。
2. 為保證結(jié)果準(zhǔn)確且避免試劑損失,測定前請仔細閱讀說明書(以實際收到說明書內(nèi)容為準(zhǔn)),確認試劑儲存和準(zhǔn)備是否充分,操作步驟是否清楚,且務(wù)必取2-3個預(yù)期差異較大的樣本進行預(yù)測定。
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