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            植物總酚含量檢測試劑盒的說明書

            來源:上海尚寶生物科技有限公司   2022年09月05日 11:11  

            植物總酚含量檢測試劑盒

            產(chǎn)品貨號:BA1798

            產(chǎn)品規(guī)格:120T

            產(chǎn)品簡介:

            酚類物質(zhì)是植物體中重要的次生物質(zhì),對植物生長發(fā)育有一定的調(diào)節(jié)作用,能夠清除自由基起到抗氧化的作用,并具有較高的營養(yǎng)價值和醫(yī)療保健作用,同時在植物抗病、基因的誘導(dǎo)表達和生物固氮等方面也具有重要作用,在化妝品、食品和醫(yī)藥等領(lǐng)域具有廣泛應(yīng)用。酚類物質(zhì)在堿性條件下能夠?qū)㈡u鉬酸還原生成藍色化合物,產(chǎn)物在760nm處具有特征吸收峰,通過吸光值的變化即可定量檢測植物中總酚的含量。

            產(chǎn)品組成:

            名稱

            規(guī)格

            保存條件

            使用說明及注意事項

            提取液

            液體120mLx1

            4℃

            -

            試劑一

            液體5mLx1

            4℃ 避光

            具有刺激性操作時請做好防護措施

            試劑二

            液體8mLx1

            4℃

            -

            標(biāo)準(zhǔn)品

            粉劑x1

            (5mg沒食子酸標(biāo)準(zhǔn)品)

            4℃ 避光

            使用前加入1mL蒸餾水充分溶解

            (50加熱促溶,即為5mg/mL沒食子酸標(biāo)準(zhǔn)液)

            標(biāo)準(zhǔn)稀釋液的制備:將5mg/mL沒食子酸標(biāo)準(zhǔn)液使用蒸餾水稀釋至0.30.2、0.1、0.050.025、0.0125mg/mL即為標(biāo)準(zhǔn)稀釋液。

            序號

            A

            1

            2

            3

            4

            5

            6

            稀釋前濃度(mg/mL)

            5.0

            1.0

            1.0

            1.0

            0.1

            0.05

            0.025

            標(biāo)準(zhǔn)液體積(μL)

            100

            150

            100

            50

            200

            200

            200

            蒸餾水體積(μL)

            400

            350

            400

            450

            200

            200

            200

            稀釋后濃度(mg/mL)

            1.0

            0.3

            0.2

            0.1

            0.05

            0.025

            0.0125

            操作步驟(僅供參考)

            1. 植物總酚的提?。筛鶕?jù)預(yù)實驗結(jié)果適當(dāng)調(diào)整樣本量及比例)植物樣本烘干至恒重,粉碎后過30-50目篩;稱取約100mg粉碎樣本,加入2mL提取液,超聲提取(60℃,功率300W,超聲5s,間歇8s,總時間30min),12000rpm常溫離心10 min,取上清即為待測樣本。

            2. 測定步驟分光光度計/酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長至760nm,蒸餾水調(diào)零。

            96孔板或微量玻璃比色皿中依次加入下列試劑:

            試劑

            測定組(μL)

            對照組(μL)

            標(biāo)準(zhǔn)組(μL)

            空白組(μL)

            待測樣本

            10

            10

            -

            -

            標(biāo)準(zhǔn)稀釋液

            -

            -

            10

            -

            蒸餾水

            -

            -

            -

            10

            試劑一

            50

            -

            50

            50

            充分混勻,25℃靜置2min

            試劑二

            50

            50

            50

            50

            蒸餾水

            90

            140

            90

            90

            充分混勻,25℃靜置10min

            吸光值測定:測定760nm處吸光值,記為A測定、A對照、A標(biāo)準(zhǔn)和A空白;計算?A測定=A測定-A對照,?A標(biāo)準(zhǔn)=A標(biāo)準(zhǔn)-A空白。注:每個測定組均需設(shè)一個對照組,空白組只需測定1-2次。

            標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立:以0.30.2、0.1、0.05、0.025、0.0125mg/mL為橫坐標(biāo)(x),以其對應(yīng)的?A標(biāo)準(zhǔn)為縱坐標(biāo)(y),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,得到標(biāo)準(zhǔn)方程y=kx+b,將?A測定帶入公式中得到xmg/mL)。

            3. 植物總酚含量計算

            按植物樣本蛋白濃度計算

            總酚含量(mg/mg prot)= x×V提取/(Cpr×V提取)=x/Cpr

            按植物樣本質(zhì)量計算

            總酚含量(mg/g)=x×V提取/W=2×x/W

            注釋:V提:提取液總體積,2mL;Cpr:樣本蛋白濃度,mg/mL;W:樣品質(zhì)量,g。

            注意事項:

            1. 若測定吸光值超出標(biāo)準(zhǔn)吸光值線性范圍,建議適當(dāng)增加樣本量或?qū)⒋郎y樣本適當(dāng)稀釋后再進行測定,計算時相應(yīng)修改。

            2. 為保證結(jié)果準(zhǔn)確且避免試劑損失,測定前請仔細閱讀說明書(以實際收到說明書內(nèi)容為準(zhǔn)),確認試劑儲存和準(zhǔn)備是否充分,操作步驟是否清楚,且務(wù)必取2-3個預(yù)期差異較大的樣本進行預(yù)測定。




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