通過基因重組制備的抗體片段（Fab）等低分子抗體，與完整抗體相比，其分子尺寸更小，具有易擴(kuò)散、滲透性強(qiáng)，以及不會與Fc受體產(chǎn)生相互作用、副作用小等優(yōu)點(diǎn)。并且，可以利用大腸桿菌、CHO細(xì)胞等獲得高濃度、高表達(dá)的抗體片段，因此在抗體藥物、診斷用藥的應(yīng)用上備受關(guān)注。

一般來講，低分子抗體的純化工藝初步捕獲（Capture）步驟推薦使用Protein L親和層析（AFC），其后接離子交換層析（IEC）等進(jìn)行精純。下面介紹幾個以Protein L為配基的親和填料分離純化低分子抗體的相關(guān)文獻(xiàn)。

● 抗體的基本結(jié)構(gòu)及分離抗體時使用的親和層析配基

● 使用Protein L親和層析等填料從大腸桿菌、CHO細(xì)胞中純化低分子抗體的相關(guān)文獻(xiàn)

● 從大腸桿菌中分離純化重組Fab和相關(guān)雜質(zhì)的示例（文獻(xiàn)No. 1）

（要點(diǎn)）

• 確立了大腸桿菌表達(dá)的重組低分子抗體(Fab)的純化方法，并對相關(guān)雜質(zhì)進(jìn)行了分離和識別（表征）。

• 通過使用Protein L親和層析、Protein G親和層析及陽離子交換層析的三步層析法（自動化），對4種重組Fab進(jìn)行純化，再做質(zhì)譜分析。

• 識別出純化產(chǎn)物中的Fab異構(gòu)體、Fab相關(guān)雜質(zhì)的L鏈（LC）以及L鏈的低分子片段（LMW）。

• 自動化Fab純化及分析法的確立，讓生產(chǎn)菌株及培養(yǎng)條件的優(yōu)化變得容易。

● 使用Protein L親和層析從大腸桿菌分離純化重組Fab及相關(guān)雜質(zhì)的示例（出自文獻(xiàn)1）

使用TOYOPEARL AF-rProtein L-650F，有效分離出目標(biāo)物質(zhì)Fab，以及產(chǎn)品相關(guān)雜質(zhì)的L鏈（LC）和LC低分子片段（LMW）。

Ref.: C. Schimek et al., Three-dimensional chromatography for purification and characterization of antibody fragments and related impurities from Escherichia coli crude extracts,
J. Chromatography A, available on line November 13, 2020, 461702

● Protein L親和填料和篩選用預(yù)裝柱產(chǎn)品一覽表

* Ca⁺⁺Pure-HA是美國制造的產(chǎn)品，受美國相關(guān)出口法令管轄。

**填料有不同粒徑和不同包裝規(guī)格的產(chǎn)品。

SkillPak分為1 mL預(yù)裝柱（7 mm I.D.×2.5 cm）和5 mL預(yù)裝柱（8 mm I.D.×10 cm）。

【1 mL預(yù)裝柱】

進(jìn)口：使用“貨號0017955 拉緊螺栓型（帶包頭）”，不可使用“貨號0016566 便攜式接頭·1/16"（PEEK）”。

出口：可直接連接內(nèi)螺紋接頭，連接外螺紋接頭時需使用管套（“貨號0017898 拉緊螺栓型管套”）等配件。

【5 mL預(yù)裝柱】

進(jìn)口和出口：使用“貨號0016566 便攜式接頭·1/16"”或“貨號0017955 拉緊螺栓型（帶包頭）”。