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細胞凍存前需要做什么預(yù)處理嗎
01在細胞被消化和離心后，去除上清液并收集細胞沉淀，它們通常需要用冷凍保存液再次懸浮并轉(zhuǎn)移到冷凍保存管中。凍存液中一般含有滲透型的保護液如甘油或10%的二甲基亞砜(DMSO)和10%-90%胎牛血清。
02細胞內(nèi)外的主要成分是水。如果細胞在沒有保護溶液的情況下直接冷凍，細胞內(nèi)外的水會凝結(jié)成冰晶，對細胞造成內(nèi)源性的機械損傷。細胞內(nèi)的水凝結(jié)引起的細胞脫水也會引起細胞內(nèi)pH值的變化、蛋白質(zhì)變性、細胞內(nèi)部器官功能的喪失，甚至細胞核內(nèi)的DNA損傷，最終可能導(dǎo)致細胞死亡。
03而凍存液往往都是易溶解的小分子物質(zhì)，具有細胞滲透性，可以穿過細胞膜，進入細胞內(nèi)，降低冰點，同時又可以提高細胞膜對水的通透性，使得細胞內(nèi)水分滲出到細胞外，從而減少細胞內(nèi)冰晶的形成。
在準備冷凍靶細胞之前，必須確保細胞處于最佳生長狀態(tài)，這可以通過以下指標進行觀察：
1培養(yǎng)基的顏色和渾濁情況
培養(yǎng)基的顏色可以指示細胞是否過度生長(例如，如果細胞是黃色，則表示它們過度生長)；介質(zhì)的渾濁度通常表明存在污染，不適合冷凍。
2細胞培養(yǎng)的時間
通常，建議將新恢復(fù)的細胞冷凍約兩周。如果細胞連續(xù)培養(yǎng)兩個月以上，性狀率會發(fā)生一些變化，此時的細胞不適合冷凍。
3細胞的數(shù)目
在凍存過程中，每只凍存管內(nèi)細胞最佳濃度為5x10^6個/ml—1x10^7個/ml，高密度或低密度對細胞存活率有一定影響。當細胞數(shù)量不足時，不建議冷凍細胞。
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