中壓制備色譜是一般由泵提供壓力,壓力在5~20bar。中低壓色譜柱與常壓柱、HPLC柱有比較大的不同:在使用是是封閉的,但是可以比較方便的打開(kāi)與調(diào)節(jié)長(zhǎng)度,這與中低壓色譜常常固體上樣相適應(yīng)的。中低壓制備色譜柱的材質(zhì)主要有塑料柱、玻璃柱、不銹鋼柱三種。
中壓液相制備色譜的主要部件為輸液泵、進(jìn)樣閥、檢測(cè)器、餾分收集器等,早期的中壓液相制備色譜,其輸液泵大流速可達(dá)156mL/min,并配有阻尼器,以保證液流的穩(wěn)定;進(jìn)樣器配有0.5-50mL的不同體積的定量管;檢測(cè)器有紫外和示差折光檢測(cè)器,流通池體積比較大,允許大流量流動(dòng)相通過(guò)而無(wú)需分流;餾分收集器有原盤(pán)式和排式兩種,原盤(pán)式的接收管多達(dá)80個(gè),而后者則更多;色譜柱內(nèi)徑9-105mm,長(zhǎng)度250-1760mm不等。
對(duì)于一般中壓制備色譜,當(dāng)色譜柱直徑較大時(shí),柱頭往往設(shè)計(jì)成錐形或有類似于傘狀的液流導(dǎo)向結(jié)構(gòu),使得當(dāng)大量樣品進(jìn)入到柱頭上時(shí),能迅速地分散到整個(gè)柱橫截面上,及時(shí)被流動(dòng)相沖走,避免了因樣品的局部過(guò)濃而引起柱超負(fù)荷和譜帶加寬。柱子填料則采用比較耐壓的交聯(lián)改性的多糖凝膠(如Sepharose CL,Superose等),聚合物微球,復(fù)合材料介質(zhì)或硬質(zhì)SiO2基體的化學(xué)鍵合相等,粒徑一般在25~40μm(zui常用的填料尺寸是15-25μm,25-40μm或40-63μm),可采用濕法或干法裝柱。
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