乳酸脫氫酶（LDH）檢測試劑盒（二硝基苯肼微板法）

產(chǎn)品貨號：BA1696

產(chǎn)品規(guī)格：50T/100T

產(chǎn)品簡介:

乳酸脫氫酶(lactate dehydrogenase，LDH或LD)屬于氧化還原酶，能夠催化氫氧原子或電子從一種底物轉(zhuǎn)移到另一種底物上乳酸脫氫酶是糖酵解和糖異生的一個極其重要的酶，含有鋅離子，廣泛分布于人和動物組織、植物和微生物，能可逆的催化乳酸 (L)和丙酮酸(P)之間的氧化還原反應(yīng)。其反應(yīng)公式：乳酸+NAD + →丙酮酸+NADH + H 。其中：L→P為正向反應(yīng)；P→L為逆向反應(yīng)。

乳酸脫氫酶(LDH)檢測試劑盒(二硝基苯肼微板法)其檢測原理是以NAD為受氫體，乳酸脫氫酶催化乳酸脫氫生成丙酮酸，丙酮酸與二硝基苯肼反應(yīng)生成丙酮酸二硝基苯腙，后者在堿性溶液中呈棕紅色，顏色深淺與丙酮酸濃度呈正比，酶標(biāo)儀檢測440nm處吸光度，通過測得的丙酮酸含量計算酶的活性。該方法的優(yōu)點是：1、試劑原料容易獲得；2、較為經(jīng)典的方法；3、適用于手工操作。該試劑盒僅用于科研領(lǐng)域，不宜用于臨床診斷或其他用途。

產(chǎn)品組成：

自備材料：

1. 蒸餾水

2. 離心管

3. 恒溫箱或水浴鍋

4. 酶標(biāo)儀、96孔板

操作步驟：

1. 準(zhǔn)備樣品：

①血漿、血清樣品：血漿、血清按照常規(guī)方法制備，10倍稀釋后可以用于本試劑盒的測定，室溫保存3天，用于LDH的檢測。

②細胞或組織樣品：取恰當(dāng)細胞或組織進行勻漿，低速離心取上清，室溫保存3天，用于LDH的檢測。

③(選做)樣品準(zhǔn)備完畢后可以用BCA蛋白濃度測定試劑盒測定蛋白濃度，以便于后續(xù)計算單位蛋白重量組織或細胞內(nèi)的LDH含量。

2. 稀釋標(biāo)準(zhǔn)品：用LDH Assay buffer準(zhǔn)確稀釋丙酮酸標(biāo)準(zhǔn)(5mmol/L)至0.5mmol/L，按下表稀釋系列標(biāo)準(zhǔn)品。

3. 配制堿性顯色工作液：按堿性顯色液：蒸餾水=2:3的比例混合，即為堿性顯色工作液。

4. LDH酶促：按照下表設(shè)置空白管、標(biāo)準(zhǔn)孔、對照孔、測定孔，溶液應(yīng)按照順序依次加入，并注意避免產(chǎn)生氣泡。如果樣品中酶活性過高，可減少樣品用量或適當(dāng)稀釋后再行測定。

5. LDH測定：混勻，室溫放置5min，酶標(biāo)儀440nm處測定各孔吸光度(記為A空白、A標(biāo)準(zhǔn)、A對照、A測定 )。

計算：

LDH活性單位的定義：以100ml血清，在37℃孵育15min， LDH催化底物產(chǎn)生1μmol丙酮酸為一個金氏酶活力單位。根據(jù)酶活性定義，計算出樣品中的LDH活性。

以LDH活力(金氏)單位(U)為橫坐標(biāo)，以(A標(biāo)準(zhǔn)-A空白 )吸光度之差值為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，用(A測定-A對照 )吸光度之差值在標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出待測樣品的LDH酶活力單位。

其中：A標(biāo)準(zhǔn)=標(biāo)準(zhǔn)孔的吸光度

A空白=空白孔的吸光度

A測定=測定孔的吸光度

A對照=對照孔的吸光度

注意事項:

1. 血清或肝素抗凝血漿檢測效果較好，草酸鹽、EDTA抗凝劑對LDH活性有抑制作用。

2. 避免使用溶血樣本。處理后的樣品應(yīng)及時檢測，否則易失效。

3. LD4和LD5對冷不穩(wěn)定，提取出來的血清樣本，不宜冰箱放置，室溫放置2~3天有效。

4. 比色應(yīng)在3~15min內(nèi)完成，否則吸光度會下降。

5. 酶促反應(yīng)中，組織勻漿液取樣量為5~30ul，應(yīng)相應(yīng)增加空白和標(biāo)準(zhǔn)中蒸餾水的用量。

6. 如果樣品中酶活性過高，可減少樣品用量或適當(dāng)稀釋后再行測定。

7. 堿性顯色液有一定腐蝕性，請小心操作。

8. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

有效期： 6個月有效。