游離膽固醇（FC）含量檢測試劑盒（可見分光光度法）

產(chǎn)品貨號：BA1451

產(chǎn)品規(guī)格：50管/48樣

產(chǎn)品簡介：

FC是構(gòu)成細(xì)胞膜的主要成分，也是合成腎上腺皮質(zhì)激素、性激素、膽汁酸及生素D等生理活性物質(zhì)的重要原料。FC濃度可作為脂代謝的指標(biāo)。測定原理：FC氧化酶催化FC生成4-膽甾烯酮和H₂O₂，過氧化物酶催化H₂O₂、4-氨基安替比林和酚生成紅色醌類化合物，在500nm有吸收峰，其顏色深淺與FC含量成正比。

產(chǎn)品組成：

溶液的配制：

1. 提取液：自備無水乙醇；

2. 標(biāo)準(zhǔn)品：10mg膽固醇，臨用前加入517μL無水乙醇，振蕩溶解，即為50μmol/mL的膽固醇標(biāo)準(zhǔn)溶液，再將其用無水乙醇稀釋為1μmol/mL的標(biāo)準(zhǔn)液，待測。

技術(shù)指標(biāo)：

檢出限：0.055μmol/mL

線性范圍：0.0625-4μmol/mL

注意：實驗之前建議選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測。

需自備的儀器和用品： 

可見分光光度計、水浴鍋、可調(diào)式移液器、1mL玻璃比色皿、研缽/勻漿器、無水乙醇、蒸餾水。

操作步驟：

一、樣本處理（可適當(dāng)調(diào)整待測樣本量，具體比例可以參考文獻(xiàn)）

1. 組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL提取液）進(jìn)行冰浴勻漿。8000g，4℃離心10min，取上清置冰上待測。

2. 細(xì)菌、細(xì)胞：按照細(xì)胞數(shù)量（10⁴個）：提取液體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬細(xì)胞加入1mL提取液），冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率300w，超聲2秒，間隔3秒，總時間3min）；然后8000g，4℃，離心10min，取上清置于冰上待測。

3. 血清（漿）樣本：直接測定。

二、測定步驟 

1. 可見分光光度計預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長至500nm，蒸餾水調(diào)零。

2. 按需取出一定量的工作液，并在37℃水浴中預(yù)熱30min，其余的4℃保存。

3. 樣本測定：1.5mL離心管中加入下列試劑：

混勻，室溫靜置15min后于500nm下測吸光度，記為A空白管、A標(biāo)準(zhǔn)管、A測定管。（空白管和標(biāo)準(zhǔn)管分別只需做1-2個）

三、計算公式 

1. 血清（漿）中FC含量計算：

FC含量（μmol/dL）=C標(biāo)準(zhǔn)液×（A測定管-A空白管）÷（A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管）×100

=100×（A測定管-A空白管）÷（A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管）

C標(biāo)準(zhǔn)液：標(biāo)準(zhǔn)液的濃度，1μmol/mL；100：單位換算系數(shù)，1dL=100mL。

2. 組織中FC含量計算：

(1) 按樣本蛋白濃度計算

FC含量（μmol/mg prot）=C標(biāo)準(zhǔn)液×（A測定管-A空白管）÷（A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管）×V樣總÷（Cpr×V樣總）

=（A測定管-A空白管）÷（A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管）÷Cpr

(2) 按樣本質(zhì)量計算

FC含量（μmol/g質(zhì)量）=C標(biāo)準(zhǔn)液×（A測定管-A空白管）÷（A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管）×V樣總÷W

=（A測定管-A空白管）÷（A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管）÷W

C標(biāo)準(zhǔn)液：標(biāo)準(zhǔn)液的濃度，1μmol/mL；V樣總：加入提取液的體積，1mL；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g。

3. 細(xì)胞、細(xì)菌中FC含量計算

FC含量(μmol/10⁴ cell)=C標(biāo)準(zhǔn)液×(A測定管-A空白管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管)×V樣總÷500

=0.002×（A測定管-A空白管）÷（A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管）

C標(biāo)準(zhǔn)液：標(biāo)準(zhǔn)液的濃度，1μmol/mL；500：細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量，500萬；V樣總：加入提取液的體積，1mL。

注意事項： 

如果樣本吸光值大于1.5，建議將樣本用提取液稀釋后進(jìn)行測定。