免疫熒光染色原理及步驟

免疫熒光又稱免疫熒光抗體。免疫熒光實(shí)驗(yàn)原理是將熒光素標(biāo)記在相應(yīng)的抗體上，直接與相應(yīng)抗原反應(yīng)。其優(yōu)點(diǎn)是方法簡(jiǎn)便、特異性高，非特異性熒光染色少，相對(duì)使用標(biāo)記抗體用量偏大。利用抗原抗體反應(yīng)進(jìn)行組織或細(xì)胞內(nèi)抗原物質(zhì)的定位。

  下面詳細(xì)介紹免疫熒光染色步驟：

  1. 滴加 0.01mol/L，pH7.4 的PBS于待檢標(biāo)本片上，10min后棄去，使標(biāo)本保持一定濕度。

  2. 滴加適當(dāng)稀釋的熒光標(biāo)記的抗體溶液，使其全部覆蓋標(biāo)本，置于有蓋搪瓷盒內(nèi)，保溫一定時(shí)間(參考：30min)。

  3. 取出玻片，置玻片架上，先用 0.01mol/L，pH7.4 的 PBS 沖洗后，再按順序過 0.01mol/L，pH7.4 的 PBS 三缸浸泡，每缸 3-5 min，不時(shí)振蕩。

  4. 取出玻片，用濾紙吸去多余水分，但不使標(biāo)本干燥，加一滴緩沖甘油，以蓋玻片覆蓋。

  5. 立即用熒光顯微鏡觀察。觀察標(biāo)本的特異性熒光強(qiáng)度，一般可用“+”表示：(-)無熒光；(±)極弱的可疑熒光；(+)熒光較弱，但清楚可見；(++)熒光明亮；(+++--++++)熒光閃亮。待檢標(biāo)本特異性熒光染色強(qiáng)度達(dá)“++”以上，而各種對(duì)照顯示為(±)或(-)，即可判定為陽性。