游離血紅蛋白（FHb）檢測(cè)試劑盒

（鄰聯(lián)甲苯胺比色法）

產(chǎn)品貨號(hào)：BA1821

產(chǎn)品規(guī)格：50T/100T

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

血紅蛋白(Hemoglobin，Hb或HGB)是高等生物體內(nèi)負(fù)責(zé)運(yùn)載氧的一種蛋白質(zhì)，是能使血液呈紅色的蛋白。血紅蛋白由四條鏈組成，兩條α鏈和兩條β鏈，每一條鏈有一個(gè)包含一個(gè)鐵原子的環(huán)狀血紅素，Hb在氧含量高的區(qū)域容易與氧結(jié)合，在氧含量低的區(qū)域又容易與氧分離，血紅蛋白的這一特性，使紅細(xì)胞具有運(yùn)輸氧的功能，血管溶血時(shí)，血漿游離血紅蛋白(free hemoglobin)濃度增高。

游離血紅蛋白檢測(cè)試劑盒 (鄰聯(lián)甲苯胺比色法)檢測(cè)原理是血紅蛋白中亞鐵血紅素有類(lèi)似過(guò)氧化物酶的作用，可在氧化劑的作用下催化鄰聯(lián)甲苯胺(O-tolidine)產(chǎn)生青色或藍(lán)色產(chǎn)物，吸收峰在630nm；在酸性條件下產(chǎn)物呈黃色，吸收峰在435nm，產(chǎn)物黃色越深，說(shuō)明FHB含量越高，反之越低。通過(guò)分光光度比色法測(cè)定435nm處吸光度，就可計(jì)算出血漿游離血紅蛋白含量。該試劑盒主要用于血漿樣本，亦可用于測(cè)定細(xì)胞或組織的裂解液或勻漿液等樣品中游離血紅蛋白含量。該試劑盒僅用于科研領(lǐng)域，不宜用于臨床診斷或其他用途。

產(chǎn)品組成：

 自備材料：

1. 96孔板、酶標(biāo)儀或分光光度計(jì)

2. 生理鹽水或蒸餾水

操作步驟(僅供參考)：

1. 準(zhǔn)備樣品：

①血漿、尿液樣品：血漿、血清按照常規(guī)方法制備后可以直接用于本試劑盒的測(cè)定，尿液通常也可以直接用于測(cè)定，獲得的樣品-20℃凍存?zhèn)溆谩?

②細(xì)胞或組織樣品：取恰當(dāng)?shù)募?xì)胞或組織裂解液，如果有必要需進(jìn)行適當(dāng)勻漿，低速離心取上清，獲得的樣品-20℃凍存?zhèn)溆谩?

2. 配制Hb標(biāo)準(zhǔn)品工作液：取Hb(1mg/ml) 10μl加入90μl生理鹽水，即為標(biāo)準(zhǔn)品工作液(100μg/ml)。

3. FHB加樣：取96孔板或EP管，按照下表設(shè)置空白孔/管、標(biāo)準(zhǔn)孔/管、測(cè)定孔/管，溶液應(yīng)按照順序依次加入，并注意避免產(chǎn)生氣泡。如果樣品中的血紅蛋白含量過(guò)低，可以增加各管用量（0.02增加到0.1或其他用量，保證各管體積一致即可）；如果樣品中的血紅蛋白含量過(guò)高，可以減少樣品用量或適當(dāng)稀釋后再進(jìn)行測(cè)定。樣品的檢測(cè)最好能設(shè)置平行孔/管，尤其是標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)作三復(fù)孔/管。

4. FHB測(cè)定：空白調(diào)零，以分光光度計(jì)測(cè)定435nm處標(biāo)準(zhǔn)孔/管和測(cè)定孔/管的吸光度，如果無(wú)法檢測(cè)435nm，亦可檢測(cè)425～450nm范圍內(nèi)吸光度。

計(jì)算結(jié)果：

血漿游離血紅蛋白(mg/L)=測(cè)定吸光度/標(biāo)準(zhǔn)吸光度×100(mg/L)，一般＜40mg/ml

注意事項(xiàng):

1. Hb(1mg/ml)為市售的牛血紅蛋白與生理鹽水配制而成的，未用HiCN標(biāo)定其濃度，可能有一定誤差，有特殊需求的可以自備相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)品。

2. Hb(1mg/ml)和標(biāo)準(zhǔn)品工作液(100μg/ml)均應(yīng)4℃保存，同時(shí)應(yīng)避免污染。

3. 也可用酶標(biāo)儀測(cè)定，但應(yīng)根據(jù)酶標(biāo)儀的最大檢測(cè)體積進(jìn)行調(diào)整。

4. 本反應(yīng)比較快，加入Acid Assay Buffer和蒸餾水后應(yīng)立即檢測(cè)，一般30min內(nèi)顏色變化不大，但應(yīng)保證不同批次實(shí)驗(yàn)用相同的檢測(cè)時(shí)間。

5. O-tolidine Solution和Acid Assay Buffer由一定腐蝕性，請(qǐng)小心操作，避免直接接觸身體。

6. 氧化劑含有少量的過(guò)氧化氫，使用后應(yīng)及時(shí)擰緊瓶蓋，如果反應(yīng)不變化，可考慮重新配制本氧化劑溶液。（0.05%水溶液即可）

7. 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

有效期：6個(gè)月有效。