超高效感受態(tài)細(xì)胞制備試劑盒

產(chǎn)品貨號(hào)：BA1849

產(chǎn)品規(guī)格：100ul×100

產(chǎn)品介紹：

Speed E.coli Transformation Kit是尚寶生物科技有限公司研發(fā)可實(shí)現(xiàn)快速轉(zhuǎn)化的感受態(tài)細(xì)胞制備試劑盒，適用于實(shí)驗(yàn)室多種菌株，特別是DH5α, JM109, DH10B, XL1-Blue等。特殊的感受態(tài)試劑配方，使轉(zhuǎn)化效率可達(dá)到10⁸-5×10⁹cfu/ug pUC19 DNA, 轉(zhuǎn)化整個(gè)過(guò)程不需冰浴、熱激和孵育等步驟，最快30秒即可實(shí)現(xiàn)好的轉(zhuǎn)化。

產(chǎn)品特色：

1. 轉(zhuǎn)化快：最快可30快速轉(zhuǎn)化，不需冰浴、熱激和孵育步驟

2. 效率高：達(dá)到10⁸-5×10⁹cfu/ug pUC19 DNA

3. 穩(wěn)定性好：-70℃冰箱可保存一年時(shí)間

4. 安全性高：不需液氮處理，直接超低溫凍存即可

操作步驟(僅供參考):

以50ml的E.coli培養(yǎng)體積為例

感受態(tài)細(xì)胞制備操作步驟

1. 將0.5ml新鮮過(guò)夜培養(yǎng)的E.coli菌接種于50ml SOB培養(yǎng)基中（1:100 比例接種），在搖床中以25℃，250 rpm條件下振蕩培養(yǎng)，直至OD600nm達(dá)到0.4-0.6。

★注意: 在25℃，250 rpm振蕩培養(yǎng)可提高感受態(tài)細(xì)胞的效率；制備感受態(tài)的E.coli菌株應(yīng)處于生長(zhǎng)的對(duì)數(shù)期，即OD_600nm達(dá)到0.4-0.6，大于0.6時(shí)的細(xì)菌狀態(tài)變差，小于0.4時(shí)細(xì)菌量較少，均不適合制備感受態(tài)細(xì)胞。

2. 將第一步中的E.coli培養(yǎng)基轉(zhuǎn)移至冰上，冰浴10分鐘預(yù)冷細(xì)菌。然后在4℃條件下，3000rpm離心10分鐘。

★注意：制備感受態(tài)細(xì)胞時(shí)所有步驟都要在低溫條件下進(jìn)行，操作時(shí)動(dòng)作要輕柔，不可劇烈地處理E.coli菌體。

3. 棄去離心后的上清，加入15ml E.coli Competent Buffer, 輕柔地重懸細(xì)菌沉淀；重復(fù)實(shí)驗(yàn)步驟2的操作。

4. 棄去上清，加入5ml E.coli Competent Buffer，輕柔地重懸細(xì)菌沉淀。

5. 在冰上以100ul或200ul的體積分裝E.coli的懸浮液，直接凍存感受態(tài)細(xì)胞至-70℃超低溫冰箱中（勿用液氮處理感受態(tài)細(xì)胞）。

轉(zhuǎn)化步驟

多種轉(zhuǎn)化形式可選：30秒極速轉(zhuǎn)化；5分鐘快速轉(zhuǎn)化；常規(guī)轉(zhuǎn)化。

注意事項(xiàng)：

1. E.coli菌株影響感受態(tài)效率

不同的菌株制備的感受效率差異不同，像DH5α,JM109, DH10B,XL1-Blue ,XL10 Gold, TG1等菌株，使用 Speed E.coli Transformation Kit 制備的感受態(tài)效率較高。

2. 菌株培養(yǎng)條件

菌株培養(yǎng)時(shí)，用營(yíng)養(yǎng)更豐富的SOB培養(yǎng)基；在25℃，250rpm振蕩培養(yǎng)，會(huì)使E.coli 菌處于最佳生長(zhǎng)狀態(tài)，更適宜用于制備感受態(tài)細(xì)胞

3. 預(yù)熱平板可提高轉(zhuǎn)化效率

在轉(zhuǎn)化前，將4℃保存的平板轉(zhuǎn)移到 37℃培養(yǎng)箱中預(yù)熱一段時(shí)間，可提高轉(zhuǎn)化時(shí)的效率。

4. 轉(zhuǎn)化時(shí)加入SOC培養(yǎng)基 

在做轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)時(shí)，加入營(yíng)養(yǎng)豐富的SOC培養(yǎng)基至DNA-感受態(tài)轉(zhuǎn)化混合液中，增強(qiáng)感受態(tài)細(xì)胞的生長(zhǎng)及吸收 DNA的能力。

保存條件：低溫運(yùn)輸，4℃保存，有效期12月。

附錄：

SOB培養(yǎng)基配制

1. 組份濃度：2%（W/V）Tryptone ；0.5%（W/V）Yeast Extract；0.05%（W/V）NaCl；2.5 mM KCl；10 mM MgCl2

2. 配制方法：

① 配制250 mM KCl溶解：在90ml的去離子水中溶解1.86g KCl 后，定容至100ml。

② 配制2 M MgCl2溶液：在90ml去離子水中溶解19g MgCl2后，定容至100ml，高溫高壓滅菌。

③ 稱取下列試劑，置于1L燒杯中：Tryptone 20g；Yeast Extract 5g；NaCl 0.5g。

④ 加入約800ml的去離子水，充分?jǐn)嚢枞芙狻?

⑤ 量取10ml 250mM KCl溶解，加入到燒杯中。

⑥ 滴加5N NaOH（約0.2ml），調(diào)節(jié)pH值至7.0。

⑦ 加去離子水將培養(yǎng)基定容至1L。

SOC培養(yǎng)基配制

1. 配制1M葡萄糖溶液：在90ml去離子水中溶解18g葡萄糖，充分溶解后定容至100ml, 用0.22um濾器過(guò)濾除菌。

2. 向100ml SOB培養(yǎng)基中加入除菌的1M葡萄糖溶液2ml, 均勻混合。