快速轉(zhuǎn)膜液是一種粉末形態(tài)的安全無毒的用于濕法快速轉(zhuǎn)膜的緩沖液。使用本快速轉(zhuǎn)膜液時(shí),在400mA恒流轉(zhuǎn)膜約20-25分鐘即可將聚丙烯酰胺凝膠上的蛋白轉(zhuǎn)移至PVDF膜或硝酸纖維素膜(NC膜)等印跡膜上,并且產(chǎn)熱少,轉(zhuǎn)膜效果好。而相同的條件下使用傳統(tǒng)的轉(zhuǎn)膜液需要轉(zhuǎn)膜更長(zhǎng)時(shí)間。本產(chǎn)品為預(yù)混粉末安全無毒害,使用前需要用水和乙醇配制,但無需調(diào)節(jié)pH值。本產(chǎn)品不含有毒有害組分,也無需使用劇毒的甲醇等試劑。
下面說說快速轉(zhuǎn)膜液的操作步驟:
1、1X快速轉(zhuǎn)膜液的配制(1000ml):取50ml快速轉(zhuǎn)膜液(20X)+850ml去離子水+100ml無水乙醇2:做好轉(zhuǎn)印三明治結(jié)構(gòu),然后轉(zhuǎn)移至電泳槽中,設(shè)定恒流400mA,電泳時(shí)間25-30分鐘完成蛋白轉(zhuǎn)膜。注意:PVDF膜使用前要用無水甲醇潤濕30秒以上。
2、轉(zhuǎn)印電流建議設(shè)定恒流400mA,一般25-30分鐘可以將150kD以下蛋白全轉(zhuǎn)?。恍∮?00kD蛋白20分鐘即可全轉(zhuǎn)?。粚?duì)于大于150kD蛋白,建議延長(zhǎng)5-10分鐘。
3、凝膠的濃度影響轉(zhuǎn)印的效率,對(duì)于膠濃度7.5%,20分鐘即可完成轉(zhuǎn)印;對(duì)于膠濃度10%,25-30分鐘即可完成轉(zhuǎn)??;對(duì)于膠濃度大于10%,建議延長(zhǎng)5-10分鐘
4、40分鐘時(shí)間內(nèi)轉(zhuǎn)膜不需要放冰上,轉(zhuǎn)膜槽內(nèi)外都不可放冰預(yù)冷,否則會(huì)影響效率。
本快速轉(zhuǎn)膜液產(chǎn)熱少,外槽無須冰浴,僅用轉(zhuǎn)膜槽中的內(nèi)置冰盒進(jìn)行降溫即可。本快速轉(zhuǎn)膜液使用便捷,無需調(diào)節(jié)pH值。本產(chǎn)品適合手工配制的Tris-Gly和Hepes等緩沖系統(tǒng)的SDS-PAGE凝膠的轉(zhuǎn)膜,也適合Tris-Gly、Hepes和Bis-Tris系統(tǒng)等預(yù)制膠的轉(zhuǎn)膜。使用后轉(zhuǎn)膜液可以回收,回收后可以再使用1-2次。
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