手機(jī)版
化工儀器網(wǎng)手機(jī)版
化工儀器網(wǎng)小程序
官方微信
公眾號(hào)：chem17
掃碼關(guān)注視頻號(hào)
感覺(jué)態(tài)細(xì)胞的儲(chǔ)存和制備注意事項(xiàng)
感覺(jué)態(tài)細(xì)胞的儲(chǔ)存：
每次轉(zhuǎn)化時(shí)使用新鮮的細(xì)胞是明智的，因?yàn)殚L(zhǎng)時(shí)間儲(chǔ)存，轉(zhuǎn)化效率會(huì)降低，但這并不總是可行的。
感受態(tài)細(xì)胞可以存儲(chǔ)在-80°C長(zhǎng)達(dá)一年，沒(méi)有轉(zhuǎn)化潛能的損失。然而，瞬間凍結(jié)在液氮或-80°C冰箱是不建議的。需要在冷凍保護(hù)劑中，像哺乳動(dòng)物細(xì)胞一樣緩慢地冷凍。
使用硬紙板或聚苯乙烯泡沫塑料盒等儲(chǔ)存。
用紙片等將盒子里的細(xì)胞管隔開，分成多個(gè)小格子。
復(fù)蘇過(guò)程中，在37°C解凍細(xì)胞，轉(zhuǎn)化前用豐富培養(yǎng)基清洗防凍劑。
感覺(jué)態(tài)細(xì)胞的制備注意事項(xiàng)：
1、配制溶液的水受有機(jī)污染，會(huì)降低感受態(tài)的轉(zhuǎn)化率；
2、液氮速凍可以提高轉(zhuǎn)化效率約5倍；
3、甘油會(huì)使細(xì)菌沉淀附著力降低；
4、感受態(tài)細(xì)胞是很脆弱的，實(shí)驗(yàn)操作過(guò)程中，動(dòng)作要輕；
5、制備感受態(tài)，所用的試劑及器具的潔凈程度要求高；操作要求嚴(yán)格；轉(zhuǎn)化效率高；
6、為達(dá)到高轉(zhuǎn)化效率，活細(xì)胞數(shù)需少于108個(gè)細(xì)胞/ml；
7、不同菌株之間，OD600的數(shù)值與每毫升中活細(xì)胞數(shù)間的關(guān)系很大；
8、在大腸桿菌生長(zhǎng)曲線上，在生長(zhǎng)初期和末期兩個(gè)時(shí)期獲得較高轉(zhuǎn)化率；
9、有實(shí)驗(yàn)曾表明，可以在4℃在氯化鈣溶液中保存24-48h，在起初保存的12-24h內(nèi)，轉(zhuǎn)化效率會(huì)有所提高，然后降低到初始水平；
10、對(duì)于克隆用途來(lái)說(shuō)，每份細(xì)胞體積有50μl足矣；
11、玻璃管會(huì)降低轉(zhuǎn)化率約10倍。
相關(guān)產(chǎn)品
免責(zé)聲明
- 凡本網(wǎng)注明“來(lái)源：化工儀器網(wǎng)”的所有作品，均為浙江興旺寶明通網(wǎng)絡(luò)有限公司-化工儀器網(wǎng)合法擁有版權(quán)或有權(quán)使用的作品，未經(jīng)本網(wǎng)授權(quán)不得轉(zhuǎn)載、摘編或利用其它方式使用上述作品。已經(jīng)本網(wǎng)授權(quán)使用作品的，應(yīng)在授權(quán)范圍內(nèi)使用，并注明“來(lái)源：化工儀器網(wǎng)”。違反上述聲明者，本網(wǎng)將追究其相關(guān)法律責(zé)任。
- 本網(wǎng)轉(zhuǎn)載并注明自其他來(lái)源（非化工儀器網(wǎng)）的作品，目的在于傳遞更多信息，并不代表本網(wǎng)贊同其觀點(diǎn)和對(duì)其真實(shí)性負(fù)責(zé)，不承擔(dān)此類作品侵權(quán)行為的直接責(zé)任及連帶責(zé)任。其他媒體、網(wǎng)站或個(gè)人從本網(wǎng)轉(zhuǎn)載時(shí)，必須保留本網(wǎng)注明的作品第一來(lái)源，并自負(fù)版權(quán)等法律責(zé)任。
- 如涉及作品內(nèi)容、版權(quán)等問(wèn)題，請(qǐng)?jiān)谧髌钒l(fā)表之日起一周內(nèi)與本網(wǎng)聯(lián)系，否則視為放棄相關(guān)權(quán)利。
采購(gòu)中心