5′-核苷酸檢測試劑盒(過碘氧化比色法)

產(chǎn)品貨號：BA1825

產(chǎn)品規(guī)格：50T

產(chǎn)品簡介：

核酸(nucleic acid)是由許多核苷酸聚合成的生物大分子化合物，是生命的基本物質(zhì)之一，廣泛存在于所有動植物細胞、微生物體內(nèi)，根據(jù)化學(xué)組成不同核酸可分為脫氧核糖核酸(簡稱DNA)和核糖核酸(簡稱RNA)，核酸分子中含有一定比例的磷，DNA中磷含量為9.2%，RNA中磷含量為9.0%。

5′-核苷酸檢測試劑盒(過碘酸氧化比色法)檢測原理是5′-核苷酸核糖基的2′、3′碳原子都有羥基，這兩個碳原子之間的鍵較弱，過碘酸可氧化使其斷裂生成二醛化合物，后者與甲胺基生成化合物，該化合物在酸性條件下脫下磷酸基，測定該無機磷量，即得5′-核苷酸，無機磷與鉬酸銨形成黃色的磷鉬酸銨，隨后還原劑把高價鉬離子還原成低價鉬離子，進而形成藍色的鉬藍，在一定濃度范圍藍色深淺與磷含量成正比，在660nm處檢測吸光度，通過檢查標準曲線獲得磷含量，同時為了消除其他無機磷的干擾，測定未經(jīng)過碘酸氧化的無機磷，予以扣除，即為準確的5′-核苷酸磷。該試劑盒的特點是專一測定5′-核苷酸。該試劑盒僅用于科研領(lǐng)域，不適用于臨床診斷或其他用途。

產(chǎn)品組成：

自備材料：

1. 蒸餾水、粗制MP或其他核酸

2. 水浴鍋、離心管或試管、分光光度計、比色杯

操作步驟(僅供參考):

1. 稀釋標準品：取適量的磷標準(1mg/ml)，按磷標準(1mg/ml)：蒸餾水=1：99的比例稀釋標準品至10μg/ml，取干凈離心管或試管，按下表進行標準品濃度的依次稀釋，獲得不同濃度的多個磷標準。

2. 制備待測樣液：取用粗AMP水解液或RNA水解液，作為待測樣液。

3. 配制定磷試劑：稱取1g定磷試劑C加入10ml蒸餾水，充分溶解，即為定磷試劑C溶液。按E1：E2：E3(定磷試劑C溶液)=3：1：1混勻，即為定磷試劑，即配即用。

【注】定磷試劑C溶液4℃避光可以保存1~2月，呈深黃色至棕色即失效。定磷試劑混合液配置后當天使用，正常顏色為黃色或黃綠色，如呈棕黃色或深綠色則失效。

4. 磷加樣：按下表進行操作，依次加入下列溶液，不能顛倒，每加一種試劑，必須充分混勻。如果樣品中有無機磷，應(yīng)同時檢測無機磷，并將無機磷扣除。

5. 磷測定：空白管調(diào)零，比色杯光徑1cm，分光光度計測定660nm處標準管、氧化管、未氧化管的吸光度(分別記為A標準、A氧化、A未氧化)。

計算：以系列磷含量(μg/ml)(1~10號)為橫坐標，吸光度為縱坐標作圖，得標準曲線。氧化管為樣液中所有磷的含量，未氧化管為樣液未氧化前無機磷的含量，二者差值即為樣液中5′-核苷酸磷含量。按下列公式計算樣液中5′-核苷酸的含量：

5′-核苷酸含量(mg/ml)=(C*M/31)×(N/1000)   

式中：C=5′-核苷酸磷的質(zhì)量濃度(μg/ml)

M=所測核苷酸相對分子量，如樣液是RNA 水解液，則四種核苷酸的平均相對分子量為340。

31=磷的相對原子質(zhì)量

N=樣液稀釋倍數(shù)

1000=由μg換算為mg的倍數(shù)

注意事項：

1. 待測樣品如不能及時測定，應(yīng)置于2~8℃保存，3天內(nèi)穩(wěn)定。

2. 如果樣品濃度過高，應(yīng)用蒸餾水稀釋后重測，結(jié)果乘以稀釋倍數(shù)。

3. 定磷試劑A有腐蝕性，應(yīng)小心操作。

4. 定磷試劑C溶液4℃避光可以保存1~2月，呈深黃色至棕色即失效。

5. 定磷試劑配制后當天使用，正常顏色為黃色或黃綠色，如呈棕黃色或深綠色則失效。

6. 在加樣時，加入試劑的順序應(yīng)嚴格按照表格操作，不能顛倒，且加完后應(yīng)充分搖勻并準確計時。

7. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

保存條件：6個月有效；常溫運輸，4℃保存。