在固相萃取技術(shù)中應(yīng)用 Agilent SampliQ 優(yōu)化聚合物技術(shù)（OPT）吸附劑，可以進(jìn)行市售金印草生物堿（黃連堿和小檗堿）樣品的凈化。這些生物堿的分離是以 0.1%磷酸/甲醇溶液為流動(dòng)相，在 Agilent ZORBAX Eclipse Plus C18 色譜柱(4.6 mm × 75 mm × 3.5 µm)上，采用配備二極管陣列檢測(cè)器（DAD）的 Agilent 1200 系列高效液相色譜儀進(jìn)行。梯度洗脫時(shí)的總分析時(shí)間僅為 6 分鐘。黃連堿的回收率范圍在 101%到 106%(n=8)指尖，而小檗堿的回收率范圍則在 71%到 82%(n=8)之間，且 RSD%均小于 1。黃連堿的檢測(cè)限和定量限分別為 0.50 和 1.65 µg/mL，而小檗堿的檢測(cè)限和定量限則分別為 0.47 和1.55 µg/mL。來(lái)自 Willow 的金印草樣品含有 17 µg/mL 黃連堿和 35 µg/mL 小檗堿，而來(lái)自 Solga 金印草樣品含有 6 µg/mL 黃連堿和 12 µg/mL 小檗堿。

前言金印草（北美黃連）是多年生毛茛科草本植物，原產(chǎn)于加拿大東南部和美國(guó)東北部，是一種最古老的草藥植物，也是傳統(tǒng)中藥中常用的藥用植物。金印草的生物活性與異喹啉生物堿黃連堿和小檗堿（結(jié)構(gòu)見(jiàn)圖 1）有關(guān)，金印草中還含有其它生物堿，包括白毛莨分堿、四氫小檗堿和氫化小蘗堿[2]。金印草已經(jīng)用于感染、炎癥的治療和免疫系統(tǒng)增強(qiáng)劑[3]。然而，由于規(guī)范草藥和保健品行業(yè)的新規(guī)章和新法律的緊迫性，建立包括樣品制備、凈化和預(yù)濃縮的樣品處理方法在內(nèi)的普遍適用和高靈敏度分析方法的需求正在增加。樣品前處理是分析過(guò)程中最基本的步驟，因?yàn)樗欣谶_(dá)到由監(jiān)管部門(mén)所設(shè)定的低檢測(cè)限要求[4]。固相萃取技術(shù)（SPE）是目前常用的凈化技術(shù)之一，常用于高效液相色譜（HPLC）或氣相色譜（GC）進(jìn)行環(huán)境、食品、制藥和生物樣品分析之前的樣品處理。與傳統(tǒng)的液-液萃取相比，固相萃取具有很多優(yōu)勢(shì)，如有機(jī)溶劑使用量小、易于自動(dòng)化、更低的成本及有毒物殘留量等。近年來(lái)，有關(guān)新型固相萃取材料的發(fā)展已有諸多報(bào)道，如混合模式吸附劑和限制進(jìn)入型吸附劑、免疫親和萃取吸附劑、分子印跡聚合物、導(dǎo)電聚合物[6,7,8]。本應(yīng)用報(bào)告報(bào)道了一種采用 Agilent SampliQ 優(yōu)化聚合物技術(shù)(OPT)固相萃取柱，進(jìn)行金印草中黃連堿和小檗堿固相萃取的優(yōu)化方法，該方法采用了聚合物基吸附劑，大大減少了基體干擾，改善了分析結(jié)果。

實(shí)驗(yàn)部分試劑和化學(xué)藥品鹽酸小檗堿和鹽酸黃連堿標(biāo)準(zhǔn)物購(gòu)自 Sigma- Aldrich 公司（美國(guó)）。磷酸和氫氧化鉀購(gòu)自默克化學(xué)公司（南非），而色譜級(jí)甲醇則是從默克 KGaA 公司（德國(guó)）購(gòu)買(mǎi)。磷酸二氫鉀購(gòu)自 Saarchem 分析公司（南非）。金印草膠囊（南非伊麗莎白港 Willow 出品的金印膠囊和美國(guó)新澤西州里奧妮亞城索爾加公司出品的索爾加全能香草）購(gòu)自南非格拉姆斯頓當(dāng)?shù)氐乃幍?。固相萃取柱?AgilentSampliQ OPT 1 mL/30mg。儀器為 1200 系列梯度 HPLC-DAD系統(tǒng)，分析柱為 AgilentZORBAX Eclipse Plus C18 色譜柱(4.6 mm × 75 mm × 3.5 µm)。貯備液和標(biāo)準(zhǔn)工作液的配制1000 µg/mL 的黃連堿和小檗堿的甲醇貯備溶液，-4oC 儲(chǔ)存。所有其它標(biāo)準(zhǔn)溶液均按要求用貯備液稀釋配制。

樣品制備首先，對(duì)金印草膠囊樣品進(jìn)行均勻化處理。然后，將 200mg 均勻化處理后的樣品與 50mL 的甲醇混合，用磁力攪拌器攪拌 1 小時(shí)，得到有不溶顆粒的懸浮液。然后用疏水的聚二氟乙烯（PVDF）0.45 µm–HV 濾膜（Billerica, MA，美國(guó)）過(guò)濾。甲醇萃取物按 1:3的比例用水稀釋?zhuān)?0.01mol/L 的氫氧化鉀溶液調(diào) pH 值到 7。分離采用 5 µL 黃連堿—小檗堿標(biāo)準(zhǔn)物混合液（濃度均為 50 µg/mL）進(jìn)行 HPLC 分離條件優(yōu)化。檢測(cè)波長(zhǎng)為 242 nm，分別采用 294 nm 和350 nm 的波長(zhǎng)進(jìn)行小檗堿和黃連堿的定量。HPLC 條件列于表1 中：

結(jié)論Agilent SampliQOPT 固相萃取小柱在傳統(tǒng)中藥—金印草中黃連堿和小檗堿的分離與分析應(yīng)用中表現(xiàn)出良好的樣品凈化效果。結(jié)果表明，該方法重現(xiàn)性好、可靠性高、回收率高（黃連堿的回收率為 101%到 106%，小檗堿的回收率為 71%到 86%），RSD %小于1%。黃連堿的檢測(cè)限和定量限分別為 0.50 和 1.65 µg/mL，而小檗堿的檢測(cè)限和定量限分別為 0.47 和 1.55 µg/mL。來(lái)自 Willow 的金印草樣品含有 17 µg/mL 黃連堿和 35 µg/mL 小檗堿，而來(lái)自Solga 的金印草樣品含有 6 µg/mL 黃連堿和 12 µg/mL 小檗堿。