總膽固醇(TC)含量檢測(cè)試劑盒的原理:
TC 包括游離膽固醇和膽固醇酯,TC 是指組織中所有脂蛋白所含膽固醇之總和。利用酯酶催化膽固醇酯水解生成游離膽固醇 (FC) 和游離脂肪酸 (FFA),從而把膽固醇酯 轉(zhuǎn)化為 FC;進(jìn)一步利用膽固醇氧化酶催化 FC 氧化,生成△4-膽甾烯酮和 H2O2;最后利用過(guò)氧化物酶催化 H2O2 氧化 4-氨基安替比林和酚,生成紅色醌類化合物;在 500nm 有特征吸收峰,其顏色深淺與 TC 含量成正比。
總膽固醇(TC)含量檢測(cè)試劑盒操作步驟:
一、TC 的提取:
1、組織中TC 的提取:按照組織質(zhì)量(g):試劑一體積(mL)為1:510的比例(建議稱
取約0.1g 組織,加入1mL 試劑一)進(jìn)行冰浴勻漿,8000g 4℃離心10min,取上清,即
TC待測(cè)液。
2、 細(xì)胞、細(xì)菌中TC 的提取:先收集400-500萬(wàn)細(xì)胞或細(xì)菌到離心管內(nèi),棄上清,加1mL
試劑一,超聲波破碎1min(強(qiáng)度20%,超聲2s,停1s),8000g4℃離心10min,取上
清,即TC 待測(cè)液。
3、 血清(漿)等樣品:直接測(cè)定。
二、測(cè)定操作:
1. 分光光度計(jì)預(yù)熱30 min,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到500nm,蒸餾水調(diào)零。
2. TC 工作液置于37℃水浴30min。
3.標(biāo)準(zhǔn)管:在1mL玻璃比色皿中依次加入50μLTC 標(biāo)準(zhǔn)品和150uLTC 工作液,混勻。
靜置24h 后于500nm處比色,記為A標(biāo)準(zhǔn)管。
4.測(cè)定管:在1mL 玻璃比色皿中依次加入50μLTC 待測(cè)液和150μLTC 工作液,混勻,
靜置24h后于500nm 處比色,記為A測(cè)定管。
注意:標(biāo)準(zhǔn)管只需測(cè)定一次。
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