引言穩(wěn)定性差的化合物往往生物利用度低。特定官能團（如酰胺、酯以及內(nèi)酯等）有利于使化合物成為血漿酶（如水解酶和酯酶）的靶標(biāo)。對新化學(xué)實體（NCE）血漿穩(wěn)定性曲線的研究有助于對其分子結(jié)構(gòu)進(jìn)行修飾以改善物理化學(xué)性質(zhì)，并且可為后續(xù)研究開發(fā)選擇更適合的分子。本研究中，快速分離 LC/MS/MS 用于研究十種藥物化合物的血漿穩(wěn)定性。其中包括四種β受體阻滯劑（阿替洛爾、拉貝洛爾、美托洛爾和普萘洛爾）、一種鈣通道阻滯劑（維拉帕米）、一種 5-羥色胺受體激動劑和四種抗抑郁藥（奈法唑酮、去甲替林、丙咪嗪和曲米帕明），該分析采用利血平作為內(nèi)標(biāo)。尤卡托品是一種眼科藥物，被用作對照樣，以美托洛爾為內(nèi)標(biāo)進(jìn)行分析。

實驗部分試劑和藥品阿替洛爾、拉貝洛爾、美托洛爾、普萘洛爾、奈法唑酮、去甲替林、丙咪嗪、曲米帕明、維拉帕米、尤卡托品和利血平購自印度班加羅爾的 Sigma-Aldrich公司。HPLC 級乙腈和甲醇均購自 Lab-Scan公司。甲酸購自 Fluka 公司。用于方法開發(fā)的目標(biāo)分析物的儲備液和標(biāo)準(zhǔn)溶液用甲醇進(jìn)行配制。

樣品制備血漿用 0.1M 的鹽酸或 0.1M 的氫氧化鈉調(diào)節(jié) pH 值到 7.4。待測化合物溶解在 DMSO（二甲基亞砜）中，終濃度為 10mM，然后用 DMSO 稀釋至 40µM。孵育實驗中待測化合物的濃度為 1µM，DMSO 的終濃度為 2.5%。將 195µL 的血漿加入一個 96 孔板，然后分別加入 5µl 待測化合物。加標(biāo)血漿樣品于 37°C 孵育 2 小時。分別在0、15、30、60 和 120 分鐘時加入 400µL 利血平（內(nèi)標(biāo)）甲醇溶液終止反應(yīng)。同時，含有尤卡托品（對照化合物）的血漿樣本加入 400µL 美托洛爾（內(nèi)標(biāo)）甲醇溶液終止反應(yīng)。此外，將僅含內(nèi)標(biāo)的甲醇溶液加入血漿樣品，制備不含任何被分析物或?qū)φ栈衔锏幕|(zhì)空白。樣品板在 4°C，2500rpm 離心 45 分鐘，上清液轉(zhuǎn)移到一個新的 96 孔板供 LC/MS-MS 分析。

儀器Agilent 1200 系列快速分離液相色譜系統(tǒng)（包括一個微型真空脫氣機、二元泵、帶溫控系統(tǒng)的高性能自動進(jìn)樣器和柱溫箱）與 Agilent 6460 三重串聯(lián)四極桿質(zhì)譜儀聯(lián)用。質(zhì)譜儀為 ESI 模式，采用安捷倫噴射流技術(shù)。采用 Agilent MassHunter 工作站（版本 B.02.00）進(jìn)行數(shù)據(jù)采集，MassHunter 定量分析軟件（版本B.01.04）進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。采用 AgilentMassHunter Optimizer 軟件（B.02.00）優(yōu)化兩個重要的 MS 參數(shù)：碎裂電壓和碰撞能量。Optimizer 還可給出本研究中豐度最高的 MRM 離子對。

結(jié)論本文建立了評價十種藥物化合物血漿穩(wěn)定性的 LC 方法和質(zhì)譜條件。采用MassHunter Optimizer 軟件確認(rèn)選定母離子的響應(yīng)強的子離子。該軟件也給出了最佳的碎裂電壓和碰撞能量。這樣，很快地建立了標(biāo)準(zhǔn)品的質(zhì)譜分析方法。研究表明，本文建立的方法可用于不同種類化合物的血漿穩(wěn)定性考察。