犬布魯氏桿菌PCR檢測試劑盒使用方法：

一、稀釋PCR陽性對照（以10E2-10E7拷貝/μL這6個10倍稀釋度為例）

1. 注意：由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴散傳染性病原，本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對照，只提供可以直接使用的DNA片段作為陽性對照。

2. 標(biāo)記6個離心管，分別為7，6，5，4，3，2。

3. 用帶芯槍頭分別加入45 μL熒光PCR專用模板稀釋液（用帶芯槍頭，下同）。

4. 在7號管中加入5 μL 1×10E8拷貝/μL 的陽性對照，充分震蕩1分鐘，得1×10E7拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。

5. 換槍頭，在6號管中加入5 μL 1×10E7拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩1分鐘，得1×10E6拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。

6. 換槍頭，在5號管中加入5 μL 1×10E6拷貝/μL的陽性對照到5號管中，充分震蕩1分鐘，得1×10E5拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。

7. 重復(fù)上面的操作直到得到6個稀釋度的陽性對照。放冰上待用。

二、樣品DNA的制備

8. 如果有N個樣品，必須設(shè)置N+2個提取，多出的一個是PC（樣品制備陽性對照），一個是NC（樣品制備陰性對照）?？梢杂?0μL上步制備的PCR陽性對照的第4號（濃度為1×10E4 拷貝/μL，10μL相當(dāng)于1萬拷貝）或第5號（濃度為1×10E5 拷貝/μL，10μL相當(dāng)于10萬拷貝）再加上一定量的水使總體積跟每次制備要求的體積一樣，以此作為PC。另外用水作為NC。如果每次制備需要200μL樣品，則PC和NC的體積也必須是200μL。

9. 用自選方法純化樣品的DNA，本試劑盒跟市場上大多數(shù)病毒DNA提取試劑盒兼容。

三、設(shè)置qPCR反應(yīng)（20 μL體系，在樣品制備室進行）

10. 如果只做1次重復(fù)，則標(biāo)記N+9個PCR管，其中N+2個用于上步得到的N+2個樣品，1個用于PCR陰性對照，6個用于PCR陽性對照。如果做2-3次重復(fù)，則反應(yīng)設(shè)置數(shù)量相應(yīng)增加2或3倍。

11. 在標(biāo)記管中按下表加入各成分（本表只列出一次重復(fù)。樣品管和陰性對照設(shè)置完畢后才設(shè)置陽性對照，并且陽性對照樣品要等所有管子蓋上蓋子儲存好后加）

小鼠核因子-κB亞基p65親和肽(NF-κB p65)ELISA KitMouse nuclear factor-κB p65,NF-κB p65 ELISA Kit

小鼠核因子κB(NF-κB)ELISA KitMouse Nuclear factor-kappa B,NF-κB ELISA Kit

小鼠核因子E2相關(guān)因子2(Nrf2)ELISA KitMouse Nuclear factor erythroid 2-related factor 2,Nrf2 ELISA Kit

小鼠含免疫球蛋白樣環(huán)和上皮生長因子樣域酪氨酸激酶2(Tie-2)ELISA KitMouse tyrosine kinase with immunoglobulin-like and EGF-like domains 2,Tie-2 ELISA kit

小鼠含免疫球蛋白樣環(huán)和上皮生長因子樣域酪氨酸激酶1(Tie-1)ELISA KitMouse tyrosine kinase with immunoglobulin-like and EGF-like domains 1,Tie-1 ELISA kit

小鼠過氧化脂質(zhì)/乳過氧化物酶(LPO)ELISA KitMouse Lipid Peroxlde,LPO ELISA Kit

小鼠過氧化物酶體增殖因子活化受體β(PPAR-β)ELISA KitMouse Peroxisome Proliferator-activated Receptor β,PPAR-β ELISA Kit

小鼠過氧化物酶體增殖物激活受體α(PPAR-α)ELISA KitMouse peroxisome proliferators activator receptors alpha,PPAR-α ELISA Kit

小鼠過氧化氫酶(CAT)ELISA KitMouse Catalase,CAT ELISA Kit

小鼠果糖銨(FRA)ELISA KitMouse fructosamin,FRA ELISA kit

小鼠胱天蛋白酶9(Casp-9)ELISA KitMouse Caspase-9,Casp-9 ELISA Kit

小鼠胱天蛋白酶7(Casp-7)ELISA KitMouse Caspase 7,Casp-7 ELISA Kit

小鼠胱天蛋白酶5(CASP-5)ELISA KitMouse Caspase-5,CASP5 ELISA kit

小鼠胱天蛋白酶3(Casp-3)ELISA KitMouse Caspase 3,Casp-3 ELISA Kit

小鼠胱天蛋白酶10(CASP-10)ELISA KitMouse Caspase-10,CASP10 ELISA kit

小鼠骨形成蛋白6(BMP-6)ELISA KitMouse Bone morphogenetic protein 6,BMP-6 ELISA Kit