感謝您從研域生物訂購ELISA試劑盒，為使您的ELISA實驗順利實施，取得準確的結(jié)果，請您在實驗前仔細閱讀此實驗指南。以下是影響ELISA檢測的關(guān)鍵因素，也是眾多ELISA 用戶在實驗中經(jīng)常遇到的問題及解決方案，希望能對您的ELISA檢測有幫助：

專家問答為什么所有試劑和檢測樣本要平衡至室溫后再進行加樣操作？溫度是ELISA結(jié)合反應(yīng)的重要影響因素。為了使所有樣本在一致的溫度下反應(yīng)，實驗前務(wù)必將所有試劑平衡至室溫，包括檢測樣本。避免因溫度的動力學(xué)反應(yīng)差異而導(dǎo)致ELISA檢測結(jié)果的不準確。

如何獲得良好線性的標準曲線？

按照推薦方式保存標準品；溶解標準品之前需短暫離心，收集粉末；確保標準品溶解和混勻（大約10min），然后再進行后續(xù)的系列稀釋步驟，確保每一步都充分混勻且精確移液；顯色的恰當終止；選擇合適的數(shù)學(xué)擬合方程繪制標準曲線。

ELISA實驗為什么必須設(shè)置復(fù)孔？

為獲得更準確的實驗結(jié)果，強烈建議標準品及樣本進行復(fù)孔檢測。

因為復(fù)孔檢測可以：

計算平均值，確保實驗結(jié)果更準確；

解決實驗中誤操作造成的跳孔現(xiàn)象；

計算CV值，對實驗的操作和試劑盒的精密度進行評估。

為什么實驗過程中孵育、洗滌需要振蕩？如何振蕩？

振蕩孵育使反應(yīng)更充分，振蕩洗滌使背景更干凈。建議使用酶標專用96孔微孔板振蕩器。

孵育過程振蕩，可以加快、加強抗原抗體分子間的相互碰撞接觸，使得反應(yīng)過程更加完善，OD值通常會比未振蕩孵育的結(jié)果要高；洗滌過程振蕩，可以使洗板更干凈，在很大程度上能降低背景值，同時可以提高試劑盒檢測的靈敏度。

具體操作請參見說明書或致電研域生物。

何時終止ELISA反應(yīng)？

ELISA實驗終需要酶催化底物顯色反應(yīng)來完成，在佳時間終止反應(yīng)是ELISA試劑盒實驗成功的重要因素。在HRP-TMB酶促反應(yīng)系統(tǒng)中，當濃度標準品顏色不再變深，倒數(shù)2-3個濃度標準品顏色開始有淺藍色時，便需要終止反應(yīng)；或者也可以根據(jù)濃度標準品孔在620nm的OD值來決定，OD620=0.9-0.95之間時即可終止。

為什么酶標儀讀數(shù)時必須選用雙波長？

首先，酶標儀使用前務(wù)必預(yù)熱10-15min，使測讀結(jié)果更穩(wěn)定。其次，ELISA實驗采用雙波長測定吸光度，可以排除單波長檢測時的測定干擾（標本的濃度，干擾色等）。一般采用大波長作為參照波長，在參照波長下，檢測物的吸光值小，檢測波長和參照波長的吸光值之差可以消除非特異性吸收；因此，雙波長測定，可大限度的消除指紋、雜質(zhì)及不透光的物質(zhì)對酶標儀讀數(shù)帶來的誤差，以保證實驗數(shù)據(jù)的準確度。

為什么選擇研域生物？ELISA是蛋白定量檢測的金標準，同時對實驗操作的要求也極其嚴格。如果您希望獲得準確、穩(wěn)定的結(jié)果，希望擁有完善的數(shù)據(jù)分析，請選擇研域生物，我們將在標準化的操作流程下為您提供高質(zhì)量的檢測服務(wù)。