冰凍切片淀粉樣蛋白（AMYLOID）硫磺素S（thioflavine S）熒光染色試劑盒

產(chǎn)品說明書（中文版）

主要用途

冰凍切片淀粉樣蛋白（AMYLOID）硫磺素S（thioflavine S）熒光染色試劑是一種旨在使用硫磺素S染色技術(shù)，與淀粉樣蛋白結(jié)合，來分析存檔中的冰凍組織切片中蘋果綠熒光現(xiàn)象的*而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過精心研制、成功實(shí)驗(yàn)證明的。主要適用于冰凍組織切片的淀粉樣蛋白檢測(cè)。廣泛用于淀粉樣蛋白樣疾病的病理生理的研究。產(chǎn)品嚴(yán)格無菌，即到即用，操作簡捷，性能穩(wěn)定，熒光清晰。

技術(shù)背景

淀粉樣蛋白（AMYLOID）是一種同質(zhì)性、嗜伊紅性（eosinophilic）、不溶性的纖維蛋白（fibrous protein）聚合體，具有共同的β交叉折疊層（β sheet）組織結(jié)構(gòu)特征，沉積在細(xì)胞外。蛋白質(zhì)錯(cuò)誤折疊（misfolding），且異常自我聚集將導(dǎo)致淀粉樣變性（amyloidosis），細(xì)胞毒纖維沉積，產(chǎn)生組織損傷，進(jìn)而引起23種不同淀粉樣蛋白綜合癥，超過400種疾病，包括阿茨漢姆癥、巴金森氏癥、II型糖尿病、白內(nèi)障、朊病毒疾病等。淀粉樣蛋白斑（amyloid plaque）和神經(jīng)纖維纏結(jié)（neurofibrillary tangles；NFT）是淀粉樣蛋白綜合征的病理性特征。硫磺素S（thioflavine S），苯并噻唑（benzothiazole）衍生物，含有至少6種成分，通過脫氫硫甲苯胺（dehydrothiotoluidine）與磺酸（sulfonic acid）的甲基化而成，是*的淀粉樣蛋白熒光探針。較之硫磺素T（thioflavine T），硫磺素S更為特異，且結(jié)合能力強(qiáng)。一旦與淀粉樣蛋白纖維結(jié)合，在熒光顯微鏡下（激發(fā)波長470nm，散發(fā)波長510nm），呈現(xiàn)蘋果綠熒光。

產(chǎn)品內(nèi)容

清理液（Reagent A）

100毫升

固著液（Reagent B）            10毫升

氧化液（Reagent C）            10毫升

去干擾液（Reagent D）          10毫升

染色液（Reagent E）            10毫升

強(qiáng)化液（Reagent F）            20毫升

穩(wěn)定液（Reagent G）            10毫升

產(chǎn)品說明書               1份

保存方式

保存 染色液（Reagent E）在-20℃冰箱里，其余的保存在4℃冰箱里； 染色液（Reagent E），避免光照；有效保證3月

用戶自備

（共聚焦）熒光顯微鏡：用于組織細(xì)胞染色后觀察分析

實(shí)驗(yàn)步驟

一、 樣本固著處理

1． 取出10片待測(cè)的冰凍組織切片

2． 小心加上200微升 清理液（Reagent A）在切片上，鋪滿整個(gè)切片樣品表面

3． 室溫下孵育2分鐘

4． 小心移去切片上的 清理液（Reagent A）

5． 小心加上200微升 固著液（Reagent B）在切片上，鋪滿整個(gè)切片樣品表面

6． 室溫下孵育5分鐘

7． 小心移去切片上的 固著液（Reagent B）

8． 小心加上200微升 清理液（Reagent A）在切片上，鋪滿整個(gè)切片樣品表面

9． 室溫下孵育2分鐘

10． 小心移去切片上的 清理液（Reagent A）

二、樣本染色處理

1． 小心加上200微升 氧化液（Reagent C），鋪滿整個(gè)切片樣品表面

2． 室溫下孵育5分鐘

3． 小心移去切片上的 氧化液（Reagent C）

4． 小心加上200微升 清理液（Reagent A）在切片上，鋪滿整個(gè)切片樣品表面

5． 室溫下孵育1分鐘

6． 小心移去切片上的 清理液（Reagent A）

7． 小心加上200微升 去干擾液（Reagent D），鋪滿整個(gè)切片樣品表面

8． 室溫下孵育5分鐘

9． 小心移去切片上的 去干擾液（Reagent D）

10． 小心加上200微升 清理液（Reagent A）在切片上，鋪滿整個(gè)切片樣品表面

11． 室溫下孵育1分鐘

12． 小心移去切片上的 清理液（Reagent A）

13． 小心加上200微升 染色液（Reagent E），鋪滿整個(gè)切片樣品表面

14． 室溫下孵育8分鐘，避免光照

15． 小心移去切片上的 染色液（Reagent E）

16． 小心加上200微升 強(qiáng)化液（Reagent F），鋪滿整個(gè)切片樣品表面

17． 室溫下孵育1分鐘

18． 小心移去切片上的 強(qiáng)化液（Reagent F）

19． 重復(fù)實(shí)驗(yàn)步驟16至18一次

20． 小心加上200微升 清理液（Reagent A）在切片上，鋪滿整個(gè)切片樣品表面

21． 室溫下孵育1分鐘

22． 小心移去切片上的 清理液（Reagent A）

23． 重復(fù)實(shí)驗(yàn)步驟20至22二次

24． 小心加上200微升 穩(wěn)定液（Reagent G），鋪滿整個(gè)切片樣品表面

25． 在4℃冰箱里孵育30分鐘

26． 小心移去切片上的 穩(wěn)定液（Reagent G）

27． 小心加上200微升 清理液（Reagent A）在切片上，鋪滿整個(gè)切片樣品表面

28． 室溫下孵育1分鐘

29． 小心移去切片上的 清理液（Reagent A）

30． 封片

31． 即刻在（共聚焦）熒光顯微鏡下（激發(fā)波長470nm，散發(fā)波長510nm）觀察：

淀粉樣蛋白：呈現(xiàn)蘋果綠熒光

注意事項(xiàng)

1． 本產(chǎn)品為50次操作

2． 操作時(shí)，須帶手套

3． 本產(chǎn)品友好使用于雙重染色或重疊染色，即首先進(jìn)行常規(guī)免疫熒光染色，然后進(jìn)行硫磺素S染色

4． 試劑溶液在樣品表面時(shí)，避免有氣泡存在，同時(shí)確保鋪滿樣品表面

5． 組織細(xì)胞染色完成后，即刻進(jìn)行熒光顯微鏡觀察

6． 用戶可以使用DAPI濾波器波長進(jìn)行觀察

7． 本公司提供系列淀粉樣蛋白染色試劑產(chǎn)品

質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

1． 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定性能穩(wěn)定

2． 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定熒光清晰