黑色素瘤相關(guān)抗原E2/肝細(xì)胞癌相關(guān)蛋白3抗體分子標(biāo)記技術(shù)：

（一）原理

當(dāng)應(yīng)用化學(xué)氧化法時(NaI)遇強(qiáng)氧化劑,離子被氧化為分子,所生成的自由分子可與某些基團(tuán)進(jìn)行鹵化反應(yīng)。蛋白質(zhì)分子可進(jìn)行鹵化反應(yīng)的基團(tuán)主要為殘基,殘基也可能進(jìn)行化。在應(yīng)用胺T( Chloramine T)法的實(shí)驗(yàn)中,所用的氧化劑(1,3,4,6- tetrachloro-3a,6adipheny l-glucoluril)強(qiáng)揮發(fā)性的有機(jī)溶劑中。該溶劑加入試管后,先讓其揮發(fā)(即讓氧化劑將試管包被),然后把Na125I和蛋白質(zhì)液加入包被好的試管中,反應(yīng)完成即將混合液移入他管終止反應(yīng)。

（二）準(zhǔn)備

1.試劑

經(jīng)親和層析純化的多克隆抗體或單克隆抗體；0.5mol/L磷酸鈉緩沖液,pH7.5；無載體的Na125I3.7GBq/ml(100mCi/ml)的NaOH液；100g/L三醋酸；70%乙醇；新鮮制備的含2mg/m1絡(luò)胺T的0.5mol/L磷酸鈉緩沖液(pH7.5）；胺T反應(yīng)終止緩沖液；

（三）操作要點(diǎn)

1.用胺T法進(jìn)行化,也可在大約pH7.0的緩沖液中進(jìn)行；

2.如果氧化反應(yīng)損傷蛋白質(zhì)，可將抗體與異硫酸熒光素(FITC)偶聯(lián))胺T量減少到0.02mg/m，并將偏重亞硫酸液的濃度降到0.024mg/ml；

3. Iodogen-包被的試管可在干燥器中,于室溫下保存多年；

4.1251標(biāo)記的抗體,在制備后六周內(nèi)均可使用(1251的半衰期為59.6天）；

5.要注意保證所用的Na1251是新鮮的,陳舊制劑的比活性低；

6.碘化偶爾會對抗原的抗體結(jié)合位點(diǎn)有干擾,因此降低其結(jié)合能力,但這種情況很少見。

Phospho-Ack1 (Tyr859 + 860)磷酸化Ack1抗體

phospho-AMPK alpha-1(Ser485+Ser491)磷酸化腺苷單磷酸活化蛋白激酶α1抗體

phospho-AMPK beta 1 (Ser108)磷酸化腺苷單磷酸活化蛋白激酶β1抗體

phospho-ALK (Tyr1604)磷酸化間變型淋巴瘤激酶抗體

phospho-ATM(Ser1981)磷酸化毛細(xì)血管擴(kuò)張性共濟(jì)失調(diào)癥突變蛋白抗體

phospho-ATP citrate lyase (Ser455)磷酸化三磷酸腺檸檬酸裂解酶抗體

phospho-ATR (Ser428)磷酸化ATR抗體

AMN1細(xì)胞核重定位及紡錘體檢查點(diǎn)蛋白AMN1抗體

ASF1A細(xì)胞衰老相關(guān)蛋白ASF1A抗體

AGPHD1氨基糖苷類磷酸結(jié)構(gòu)域蛋白抗體

ASGPR1唾液酸糖蛋白受體1抗體

ARSF芳香基硫酸酯酶F抗體

AKAP5A激酶錨定蛋白5抗體

ATXN3L小腦脊髓共濟(jì)失調(diào)蛋白3抗體

ASTE1ASTE1蛋白抗體

phospho-APG4B(Ser309)磷酸化自噬相關(guān)蛋白4B抗體

AFAP微絲相關(guān)蛋白1抗體

ADORA1腺苷A1A受體抗體

ARSB芳基硫酸酯酶B抗體

ABATγ氨基丁酸轉(zhuǎn)氨酶抗體

A2BP1共濟(jì)失調(diào)蛋白2結(jié)合蛋白1抗體

ADAM17腫瘤壞死因子α轉(zhuǎn)換酶

ARNT2 芳香烴受體核轉(zhuǎn)錄蛋白2抗體

ABH8AlkB同源蛋白8抗體