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TEV重組型蛋白酶是一種常用的蛋白酶，用于在蛋白質(zhì)表達(dá)和純化過程中切割目標(biāo)蛋白的亞細(xì)胞定位肽或親和標(biāo)簽。在此文章中，我們將探討TEV重組型蛋白酶的起源、結(jié)構(gòu)和應(yīng)用方面。
TEV全稱為煙草花葉病毒(Tobacco Etch Virus)編碼的蛋白酶，其天然形式被廣泛分布于植物體內(nèi)，能夠剪切寄生于植物細(xì)胞內(nèi)的RNA病毒基因組。人工合成的TEV重組型蛋白酶出現(xiàn)于1995年，由加拿大多倫多大學(xué)的Brian Seed教授及其同事開發(fā)制備，能夠特異性地識(shí)別和切割TEV蛋白外殼上的底物序列。隨后，該產(chǎn)品被廣泛運(yùn)用于蛋白質(zhì)表達(dá)和純化中，成為生物技術(shù)領(lǐng)域的重要工具之一。
該產(chǎn)品的結(jié)構(gòu)與活性機(jī)理已經(jīng)被詳細(xì)研究。它是一種由27kDa蛋白質(zhì)構(gòu)成的單亞單位酶，具有切割底物序列ENLYFQ/G的特異性。其結(jié)構(gòu)包括一個(gè)N末端區(qū)域、一個(gè)中央峽谷和一個(gè)C末端區(qū)域。中央峽谷是TEV重組型蛋白酶與其底物序列結(jié)合的關(guān)鍵部位，其中含有兩個(gè)天然氨基酸殘基草酰胺和谷氨酰胺，能夠與底物序列內(nèi)的丙氨酸和天冬氨酸發(fā)生水解反應(yīng)，從而使目標(biāo)蛋白被切割成為兩段。
在蛋白質(zhì)表達(dá)和純化過程中，該產(chǎn)品常用于清除親和純化標(biāo)簽或者亞細(xì)胞定位肽，從而得到純凈的目標(biāo)蛋白。例如，在重組蛋白表達(dá)系統(tǒng)中，可以將目標(biāo)蛋白與親和標(biāo)簽如GST等融合表達(dá)，并在蛋白純化后進(jìn)行TEV酶切割，以去除標(biāo)簽;在細(xì)胞定位研究中，可以將熒光蛋白和其它亞細(xì)胞定位肽融合表達(dá)，然后用TEV酶去除亞細(xì)胞定位肽，以實(shí)現(xiàn)對(duì)熒光蛋白真正的定位。此外，該產(chǎn)品還可用于破壞蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用，或者在結(jié)構(gòu)生物學(xué)中用于切割蛋白晶體以便進(jìn)行X射線衍射分析。
綜上所述，TEV重組型蛋白酶是一種常用的蛋白酶，其起源于植物病毒，結(jié)構(gòu)特異性地識(shí)別和切割底物序列ENLYFQ/G。在蛋白質(zhì)表達(dá)和純化、蛋白質(zhì)相互作用
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