polyplus轉(zhuǎn)染試劑 jetPRIME®應(yīng)用

polyplus轉(zhuǎn)染試劑 jetPRIME®是一種功能強(qiáng)大、用途廣泛的DNA和siRNA轉(zhuǎn)染試劑，用于日常實(shí)驗(yàn)，可產(chǎn)生高效可靠的科學(xué)結(jié)果。jetPRIME®確保在各種粘附細(xì)胞中具有高的DNA轉(zhuǎn)染效率和優(yōu)異的基因沉默。jetPRIME®也是DNA/siRNA共轉(zhuǎn)染或幾種質(zhì)粒共遞送的理想選擇。此外，jetPRIME®試劑對(duì)細(xì)胞非常溫和，因?yàn)樗谵D(zhuǎn)染過(guò)程中需要少量的試劑和核酸。

polyplus轉(zhuǎn)染試劑 jetPRIME®應(yīng)用方向多樣，主要的應(yīng)用方向如下：

一、質(zhì)粒轉(zhuǎn)染

jetPRIME®導(dǎo)致不同來(lái)源的轉(zhuǎn)染粘附細(xì)胞系以及原代細(xì)胞的百分比非常高，如下表：

表1：使用jetPRIME®的各種細(xì)胞類型的轉(zhuǎn)染效率。轉(zhuǎn)染后24小時(shí)通過(guò)FACS分析測(cè)定GFP陽(yáng)性細(xì)胞的百分比。

質(zhì)粒是常見(jiàn)于細(xì)菌中的環(huán)狀DNA小分子。質(zhì)粒與染色體DNA分開(kāi)存在和復(fù)制，在細(xì)菌中，質(zhì)粒通常攜帶有利于細(xì)菌生存的基因。質(zhì)?？梢员挥幸獾匾胨璧募?xì)胞中，并用于在特定細(xì)胞系中過(guò)表達(dá)感興趣的基因。這一過(guò)程被稱為DNA轉(zhuǎn)染，是研究感興趣的基因功能或蛋白質(zhì)的常用方法。

二、基因編輯

CRISPR/Cas9系統(tǒng)在哺乳動(dòng)物細(xì)胞中的使用最近已經(jīng)成為在特定基因座修飾細(xì)胞基因組的一種非常方便的方法。它涉及將（a）編碼Cas9的一個(gè)或多個(gè)質(zhì)粒、特異性gRNA和最終要插入的序列，或（b）一個(gè)或兩個(gè)質(zhì)粒和RNA分子（gRNA）的混合物瞬時(shí)轉(zhuǎn)染到哺乳動(dòng)物細(xì)胞中。

三、siRNA轉(zhuǎn)染

jetPRIME®可使多種細(xì)胞系的內(nèi)源性基因表達(dá)降低90%以上。例如，jetPRIME®介導(dǎo)的用靶向HeLa細(xì)胞中內(nèi)源性層粘連蛋白A/C的10nM siRNA雙鏈體轉(zhuǎn)染HeLa細(xì)胞，將層粘連蛋白/C基因表達(dá)顯著降低到幾乎無(wú)法檢測(cè)的水平。

圖1：使用jetPRIME®的內(nèi)源性層粘連蛋白A/C沉默。用10nM的21-mer層粘連蛋白A/C siRNA轉(zhuǎn)染HeLa細(xì)胞。48小時(shí)后，使用抗層粘連蛋白A/C的抗體通過(guò)免疫熒光顯微鏡評(píng)估層粘連蛋白/C沉默。

四、不同核酸的共轉(zhuǎn)染

jetPRIME®非常適合DNA和siRNA/miRNA共轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)或幾種DNA質(zhì)粒的共遞送，用jetPRIME®進(jìn)行了DNA和siRNA遞

送，并在各種毒性極低的細(xì)胞系中觀察到高效的基因沉默。使用10nM的siRNA，在貼壁細(xì)胞中實(shí)現(xiàn)了超過(guò)90%的沉默（圖2）。

圖2：使用jetPRIME®進(jìn)行DNA和siRNA共轉(zhuǎn)染后，幾種細(xì)胞系中的外源性螢光素酶沉默。在6孔板中用每孔400ng p4CMV Luc和10nM熒光素酶siRNA進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

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