ELISA簡要操作步驟及原理以雙抗體夾心法為例，ELISA簡要操作步驟如下：

包被抗體包被到酶標(biāo)板,加樣本/標(biāo)準(zhǔn)品,加生物素標(biāo)記的檢測抗體,加HRP標(biāo)記的鏈霉親和素

加顯色底物TMB,加終止液,ELISA 試劑盒組分酶標(biāo)板（Microplate）,酶標(biāo)板，在ELISA（酶聯(lián)免疫吸附測定）中作為載體的酶標(biāo)板對(duì)抗原抗體或抗原抗體復(fù)合物的吸附起著重要作用。

標(biāo)準(zhǔn)品（Standard）

標(biāo)準(zhǔn)品即為已知濃度的目標(biāo)物(樣本中待測因子)的純蛋白，對(duì)標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行梯度稀釋，用于制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。

生物素標(biāo)記的檢測抗體(Detected Antibody)

檢測抗體即為與目標(biāo)物特異性結(jié)合的抗原/抗體鑒于酶標(biāo)二抗的局限性，現(xiàn)在廠家一般引入生物素親和素系統(tǒng)(biotin avidin system,BAS)。

洗滌液(Washing Buffer)

長時(shí)間的孵育后，會(huì)出現(xiàn)非特異性結(jié)合，這時(shí)就需要洗滌液來洗去非特異性結(jié)合的蛋白或抗體。常用的洗滌液有:磷酸鹽緩沖液(PBS)、平衡鹽緩沖液(BBS)等。

辣根過氧化物酶標(biāo)記的鏈霉親和素(HRP-Streptavidin)

鏈霉親和素是Streptomyces avidinii(阿維丁鏈霉菌)的分泌物。鏈霉親和素分子由4條相同的膚鏈組成，非特異性結(jié)合遠(yuǎn)比親和素低。在ELISA試劑盒中，用于與檢測抗體上的生物素相結(jié)合。

顯色底物 (TMB)

TMB在過氧化氫存在的情況下可被HRP或其他過氧化物酶催化生成可溶的藍(lán)色物一價(jià)物。當(dāng)顯色反應(yīng)被酸性溶液終止后，產(chǎn)物由藍(lán)色一價(jià)物轉(zhuǎn)為二價(jià)物，此時(shí)可在450nm 測定吸光度檢測。