核酸酶通過減切核酸骨架中的磷酸二酯鍵來降解DNA和RNA。 雖然有些核酸酶是有用的研究工具，但是通?？茖W家需要完整的生物樣品信息用于PCR，克隆，測序或基因編輯等應用。因此，研究核酸的科學家需要不含核酸酶的試劑和容器。水作為緩沖液和試劑的主要成分，也應該不含有核酸酶。

可是，核酸酶在實驗室中普遍存在，它們普遍存在于塑料制品和試劑中，甚至可能來自科學家自己（皮膚，唾液等），它們非常穩(wěn)定，難以滅活。因此，經常使用DEPC處理來消除它們。

DEPC（焦碳酸二乙酯）是一種有效的非特異性核糖核酸酶抑制劑，用于核糖核酸酶滅活，且已使用了多年。用DEPC對溶液進行化學處理是一種非常有效的方法，但它存在幾個缺點：

• 安全問題。 DEPC是一種疑似致癌物質，因為它可能與嘌呤發(fā)生反應，因此需要謹慎使用。此外，如果瓶子在室溫中暴露于濕潤的空氣中，DEPC可能會水解，將會產生二氧化碳，這會增加潛在的危險。

• 時間和能源消耗。 DEPC和核酸酶之間的化學反應需要一定的時間，為了破壞DEPC，需要對溶液高壓滅菌。 而高壓滅菌需要消耗大量的水和電。

圖1 DEPC的水解引入雜質 

• 引入可能影響實驗的雜質。 當DEPC在高壓滅菌時會水解產生乙醇和二氧化碳（圖1）。 乙醇可能與后續(xù)的實驗步驟中的雜質反應，有可能產生不需要的副產物。 此外，DEPC對腺苷有很強的親和力，即使只有痕量的DEPC保留在溶液中，它們也可能與腺苷核苷酸發(fā)生反應（印跡，PCR反應等）而導致實驗結果不準確，痕量DEPC也可能與胺基和硫醇反應。

• 核酸酶并非從水中直接除去，而是通過與DEPC的化學反應而失活。

是否存在可避免以上缺點的制備無核酸酶水的方法呢？經過默克純水研究人員測試超濾可以作為制備無核酸酶水的替代方法，處理方法方便安全。這個過程使用中空纖維根據其孔徑分離污染物。一次性濾頭內含標稱分子量（NMWL）13 000 Da的聚砜超濾纖維（圖2）。

圖2 Biopak^®濾頭中用于超濾的聚砜中空纖維。

研究人員用超純水溶解核糖核酸酶A并分成三份：（1）用DEPC處理并高壓滅菌；（2）通過Biopak超濾終端進行處理；（3）未處理。 將rRNA加入到每個溶液中，孵育20分鐘，然后進行變性瓊脂糖凝膠電泳。

圖3 rRNA的凝膠電泳結果，所用的核糖核酸酶溶液分別是DEPC處理、超濾處理與未處理。

圖3電泳結果顯示當使用超濾過濾核糖核酸酶溶液時，rRNA保持了完整。同時，使用常規(guī)DEPC處理核糖核酸酶溶液也能防止rRNA降解。作為對照，當核糖核酸酶溶液未處理時，rRNA被降解。這表明了使用超濾去除核糖核酸酶與通過DEPC處理滅活效果相當。

許多分子生物學應用都需要無核酸酶的水。與耗時又麻煩的DEPC處理方法不同，通過水純化系統(tǒng)的超濾終端方式獲得無核酸酶的水，是一種安全又便捷的方法。這種方法對科研有很多好處：

• 按需，方便。當需要時，可以非常容易地生產新鮮純化的無核酸酶的水。沒有必要提前訂購瓶裝無核酸酶的水，或花時間制備DEPC水。

• 沒有風險。不需要化學品操作。另外，由于沒有添加化學物質到水中，所以沒有其他試劑干擾的風險。

• 高純度無核酸酶的水。超濾技術是從水中直接除去核酸酶而不是僅僅使他們滅活。因為過濾終端被設計成直接連接到水純化系統(tǒng)的出口，例如Milli-Q^®，可以非常方便的獲得無核酸酶的超純水。