新品│Endonuclease VIII：精準(zhǔn)切割DNA受損堿基，助力基因損傷修復(fù)研究

來(lái)源：翌圣生物科技（上海）股份有限公司 2023年08月25日 17:11

新品│Endonuclease VIII：精準(zhǔn)切割DNA受損堿基，助力基因損傷修復(fù)研究

核酸內(nèi)切酶 Ⅷ(Endonuclease VIII, Endo Ⅷ)是一種具有N-糖基化酶活性(N-glycosylase)和AP-裂解酶(AP-lyase)活性的DNA損傷修復(fù)酶，參與氧化產(chǎn)生的DNA損傷的堿基切除修復(fù)。

作用原理

Endonuclease VIII識(shí)別雙鏈DNA上受損堿基并在其N-糖基化酶活性作用下切除雙鏈DNA上受損的嘧啶堿基，產(chǎn)生一個(gè)脫嘌呤(AP)位點(diǎn)。隨后，在其AP裂解酶活性作用下切割A(yù)P位點(diǎn)的3'和5'端，產(chǎn)生一個(gè)具有3'和5'磷酸的堿基缺口。

圖1. Endonuclease VIII反應(yīng)原理示意圖

翌圣Endonuclease Ⅷ

翌圣的Endonuclease Ⅷ（Cat#14536ES）由分子酶改造平臺(tái)——ZymeEditor™重組表達(dá)而來(lái)，高純度，無(wú)核酸外切酶、核酸內(nèi)切酶以及RNase殘留?？蓱?yīng)用于單細(xì)胞凝膠電泳、NGS建庫(kù)中DNA損傷修復(fù)、酶法合成DNA中釋放DNA鏈、堿洗脫，搭配UDG(Cat#10303ES)進(jìn)行含U片段的克隆等。

數(shù)據(jù)展示

受損堿基切除效果與進(jìn)口品牌一致

分別使用翌圣與進(jìn)口品牌N*的Endonuclease Ⅷ催化20 pmol寡聚核苷酸，20 µL反應(yīng)體系中加入5~40 U的Endonuclease Ⅷ 和相同酶活的UDG(Cat#10303ES)，37℃孵育1 h。瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)結(jié)果表明，翌圣Endonuclease Ⅷ與進(jìn)口品牌N*的堿基切除效果一致。

圖2. 受損堿基切除效果對(duì)比

無(wú)核酸外切酶、核酸內(nèi)切酶、RNase殘留

將10 U Endonuclease VIII分別與相應(yīng)的底物DNA/RNA在37℃孵育4 h，瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)結(jié)果表明，Endonuclease VIII 無(wú)核酸外切酶、核酸內(nèi)切酶、RNase殘留。

圖3. 核酸外切酶、核酸內(nèi)切酶、RNase殘留檢測(cè)結(jié)果

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