細(xì)胞學(xué)堂 | 如何判斷細(xì)胞狀態(tài)
培養(yǎng)細(xì)胞時(shí),由于培養(yǎng)的環(huán)境各不相同,同時(shí)細(xì)胞各階段的形態(tài)也存在一定差異,沒有一個(gè)確定的參照物去比對(duì),很多老師同學(xué)也無(wú)法確定自己所養(yǎng)細(xì)胞的狀態(tài)是否正常。
那么如何判斷細(xì)胞狀態(tài)是正常還是異常呢?本期細(xì)胞學(xué)堂將詳介紹幾種常用的判斷方法,學(xué)會(huì)這幾招,輕松辨別細(xì)胞狀態(tài)!
01 如何判斷細(xì)胞活率
臺(tái)盼藍(lán)是細(xì)胞活性染料,常用于檢測(cè)細(xì)胞膜的完整性,可以檢測(cè)出細(xì)胞是否存活。正常的活細(xì)胞,胞膜結(jié)構(gòu)完整,能夠排斥臺(tái)盼藍(lán),使之不能夠進(jìn)入胞內(nèi);而喪失活性或細(xì)胞膜不完整的細(xì)胞,胞膜的通透性增加,可被臺(tái)盼藍(lán)染成藍(lán)色。
通常認(rèn)為細(xì)胞膜完整性喪失,即可認(rèn)為細(xì)胞已經(jīng)死亡。活細(xì)胞不著色,而死細(xì)胞會(huì)被染成藍(lán)色。

(無(wú)色為活細(xì)胞,藍(lán)色為死細(xì)胞)

染色時(shí)間不能太長(zhǎng),3分鐘內(nèi)觀察,超時(shí)后活細(xì)胞也會(huì)逐漸積累染料而染成顏色,使檢測(cè)結(jié)果出現(xiàn)偏差。
在顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài):
懸浮細(xì)胞
活細(xì)胞透亮有光澤,死細(xì)胞暗淡無(wú)光且膜碎裂;
貼壁細(xì)胞
活細(xì)胞可貼壁且膜完整,死細(xì)胞不能貼壁。

(紅色圈為死細(xì)胞;綠色圈為活細(xì)胞;箭頭為血清雜質(zhì))
細(xì)胞膜作為判斷細(xì)胞活性的標(biāo)準(zhǔn)之一,有的老師用“邊界清晰”來(lái)界定,認(rèn)為邊界不清晰則是細(xì)胞狀態(tài)變差,實(shí)際情況我們也有發(fā)現(xiàn)部分細(xì)胞膜邊緣很薄再加上顯微鏡不清晰導(dǎo)致誤判,所以小普認(rèn)為膜邊界是否清晰并不是金標(biāo)準(zhǔn),我們更傾向于以細(xì)胞膜完整性作為判斷標(biāo)準(zhǔn),“膜完整”則為活細(xì)胞。

(該細(xì)胞膜邊緣薄透,若為黃光顯微鏡可能看不清)
02 如何判斷細(xì)胞形態(tài)異常

1
你的細(xì)胞應(yīng)該長(zhǎng)成什么樣?
在懷疑細(xì)胞形態(tài)改變之前,我們首先得知道一個(gè)正常的細(xì)胞應(yīng)該是什么樣的,誠(chéng)如每顆多肉都會(huì)有其獨(dú)-特的色彩和習(xí)性,細(xì)胞也有其獨(dú)-特的習(xí)性,包括生長(zhǎng)速度、形態(tài)、培養(yǎng)環(huán)境等;

2
從哪幾個(gè)方面判定細(xì)胞形態(tài)異常?
細(xì)胞的微環(huán)境會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞形態(tài)改變,例如血清直接影響細(xì)胞的形態(tài):

HK-2細(xì)胞顯微圖(無(wú)血清培養(yǎng)基培養(yǎng))

HK-2細(xì)胞顯微圖(MEM +10%FBS培養(yǎng))
是否所有的形態(tài)改變都可以被定義為異常呢?答案是否定的。從上述例子中可以看出,兩種培養(yǎng)環(huán)境下細(xì)胞形態(tài)不同,但狀態(tài)都并無(wú)異常,因此我們需要視不同情況、綜合細(xì)胞增長(zhǎng)速度進(jìn)行評(píng)判:
未更換培養(yǎng)體系時(shí)
在培養(yǎng)體系沒有更換的前提下,細(xì)胞碎裂增多,黑點(diǎn)增多、形態(tài)改變、生長(zhǎng)速度變慢,則應(yīng)考慮外源刺激物導(dǎo)致,可能已被污染,需排查污染源,并做針對(duì)性的預(yù)防措施。
更換了培養(yǎng)體系時(shí)
1
如果是因?yàn)楦鼡Q了培養(yǎng)體系后導(dǎo)致的細(xì)胞形態(tài)改變,在細(xì)胞生長(zhǎng)速度正常的情況下,可正常培養(yǎng);
2
如果細(xì)胞更換培養(yǎng)條件后,嚴(yán)重變形甚至貼壁減少且不能正常傳代,必須進(jìn)行干預(yù),可通過包被培養(yǎng)瓶促進(jìn)貼壁、增加血清濃度、與原培養(yǎng)基混合使用讓細(xì)胞過渡適應(yīng)等方式進(jìn)行改善;
3
如果細(xì)胞對(duì)于新環(huán)境反應(yīng)激烈,直接死亡,則需更換培養(yǎng)體系;
03 如何判斷細(xì)胞污染
相關(guān)產(chǎn)品
免責(zé)聲明
- 凡本網(wǎng)注明“來(lái)源:化工儀器網(wǎng)”的所有作品,均為浙江興旺寶明通網(wǎng)絡(luò)有限公司-化工儀器網(wǎng)合法擁有版權(quán)或有權(quán)使用的作品,未經(jīng)本網(wǎng)授權(quán)不得轉(zhuǎn)載、摘編或利用其它方式使用上述作品。已經(jīng)本網(wǎng)授權(quán)使用作品的,應(yīng)在授權(quán)范圍內(nèi)使用,并注明“來(lái)源:化工儀器網(wǎng)”。違反上述聲明者,本網(wǎng)將追究其相關(guān)法律責(zé)任。
- 本網(wǎng)轉(zhuǎn)載并注明自其他來(lái)源(非化工儀器網(wǎng))的作品,目的在于傳遞更多信息,并不代表本網(wǎng)贊同其觀點(diǎn)和對(duì)其真實(shí)性負(fù)責(zé),不承擔(dān)此類作品侵權(quán)行為的直接責(zé)任及連帶責(zé)任。其他媒體、網(wǎng)站或個(gè)人從本網(wǎng)轉(zhuǎn)載時(shí),必須保留本網(wǎng)注明的作品第一來(lái)源,并自負(fù)版權(quán)等法律責(zé)任。
- 如涉及作品內(nèi)容、版權(quán)等問題,請(qǐng)?jiān)谧髌钒l(fā)表之日起一周內(nèi)與本網(wǎng)聯(lián)系,否則視為放棄相關(guān)權(quán)利。