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            預混or非預混,RNA建庫試劑盒,你pick哪個呢?

            來源:翌圣生物科技(上海)股份有限公司   2023年10月20日 17:40  

            預混or非預混,RNA建庫試劑盒,你pick哪個呢?

             

            RNA測序,又稱為轉(zhuǎn)錄組測序,是高通量測序中應用非常廣泛的組學技術(shù)之一。其研究應用有:
            • 不同處理組差異基因表達分析;

            • mRNA表達量的差異研究;

            • mRNA結(jié)構(gòu)上的差異(可變剪接、融合基因、點突變(SNP)。

             

            RNA測序?qū)嶒灹鞒倘缦拢?/span>
             
             
            目前,翌圣生物RNA建庫試劑盒不斷進行升級,試劑盒越來越便捷,快速。

             

            圖.翌圣生物RNA建庫試劑盒進化軸

             

            目前,RNA建庫試劑盒已經(jīng)進化到預混版建庫試劑盒,試劑組分已經(jīng)簡化,每步操作只加一次試劑即可進行PCR。
             
            圖.非預混和預混版建庫試劑盒組分對比
             
            預混版建庫試劑盒,在操作上節(jié)省人力時間,而且單次樣本越多,效果越明顯。
             
             
             
             
            本次對比的試劑盒為翌圣非預混版建庫試劑盒(12308)和預混版建庫試劑盒(12310)進行操作比對,實驗室,使用8個樣本進行mRNA建庫。
             
            圖.實驗對比(12308ES VS 12310ES)
             

             

            #操作詳解
             
            01
            1st cDNA合成

            該步驟對片段化后的RNA進行逆轉(zhuǎn)錄,預混版RNA建庫,只需要將1st模塊試劑加入片段化后的RNA即可進行PCR,而非預混RNA建庫試劑盒,需要分開添加1st逆轉(zhuǎn)錄酶和1st逆轉(zhuǎn)錄酶buffer。

            02
            2nd合成步驟

            該步驟承接1st cDNA合成步驟進行二鏈互補鏈合成以及末修、加A等步驟。預混版RNA建庫試劑盒,只需要將完成1st cDNA PCR步驟的試劑拿出,直接加入2nd 合成試劑即可進行下步PCR操作,而非預混RNA建庫試劑盒,需要分開添加2nd合成buffer和酶。

            03
            接頭連接步驟

            該步驟承接2nd二鏈合成步驟,進行后續(xù)接頭連接。預混版RNA建庫試劑盒,只需要加入接頭連接模塊和接頭,即可進行接頭PCR過程,而非預混版RNA建庫試劑盒,需要分開添加連接酶、連接buffer以及接頭。

             

            后續(xù)PCR擴增和文庫分選、文庫定量等步驟,操作流程類型,此處不再進行贅述。整體看來,預混版RNA建庫試劑盒,不論是操作時間,還是操作的便捷度上,都有非常大的優(yōu)勢。尤其是在自動化建庫時,這種便捷度,能大大提高自動化效率。
             
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