如何看出細胞培養(yǎng)液體中存在支原體?
1. 觀察細胞的形態(tài)和生長特征:
支原體污染比較嚴重時可出現(xiàn)生長減慢,有的培養(yǎng)基pH明顯變酸,并出現(xiàn)細胞病變,以此可依次對支原體污染進行檢測,但有些情況下支原體污染引起的病變特征與病毒感染相似,因此不能準確診斷。
2. 分離培養(yǎng)法:
大多數(shù)支原體可出現(xiàn)te有的典型菌落。因而可依次盡心檢測,該方法準確、可靠,但時間長,敏感性不夠高。
3. DNA結合熒光素染色法:
利用熒光染劑(bisbenzimide,Hoechst 33258)偵測支原體污染。熒光染料會結合到DNA之Adenosine-Thymidine (A-T) rich區(qū)域,因為支原體DNA中A-T含量占多數(shù)(55~80%),所以可將其染色而偵測。被支原體污染之細胞經(jīng)染色后,在細胞核外與細胞周圍可看到許多大小均一之熒光小點,即為支原體之DNA,證明有支原體之污染。
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