微生物污染是一直是細胞培養(yǎng)的一個主要問題，大到諸如細胞間、層流室這種實驗室的設(shè)計布局，小到每一次試劑外包裝的消毒，都是在為了細胞免受外源微生物的侵害。應(yīng)各位老師們的要求，今天這篇文章主要講解細胞房的除菌方案，順便討論一下常見的無菌操作漏洞。

當(dāng)您和同門的細胞頻繁出現(xiàn)污染，更換試劑之后仍然不能改善，細胞丟棄一波又一波，建議為細胞間來場消毒吧。無論是紫外線照射（物理方法）還是甲醛加高錳酸鉀熏蒸，都是為了盡可能的殺滅空氣中的微生物。

圖1 細胞室

一、紫外線照射法

紫外線按照波長劃分為四個波段：長波UVA、中波UVB、短波UVC、真空波UVD。波長越長，穿透能力越強，其中UVC（波長200～280nm）被用來做紫外線殺菌燈，可作用于DNA使一條DNA鏈上相鄰的兩個胸腺嘧啶共價結(jié)合而形成雙聚體改變了DNA的分子結(jié)構(gòu)，干擾DNA的復(fù)制與轉(zhuǎn)錄導(dǎo)致細菌死亡或變異，缺點也是顯而易見的，UVC穿透力差，無法穿透大部分的透明玻璃及塑料，同時短時間照射即可灼傷皮膚，長期或高強度照射還會造成皮膚癌。

圖2

這里提示在購買紫外線消毒燈的時候登錄全國消毒產(chǎn)品網(wǎng)上備案信息服務(wù)平臺查詢備案，可以看到生產(chǎn)許可證，檢測報告等信息。

具體可參照：約13m²的房間30w紫外燈（距地面約2.5m）照射1h，照射前抹凈燈管灰塵，建議一周一次。照射時人員禁止入內(nèi)。

圖3 消毒產(chǎn)品網(wǎng)上備案信息

二、甲醛加高錳酸鉀熏蒸法

甲醛無易燃易爆危險易于獲得故在消毒與滅菌方面使用較為普遍。醛類主要通過凝固蛋白質(zhì)還原氨基酸使蛋白質(zhì)分子烷基化而殺滅細菌和其他微生物，KMnO4是一個強氧化劑，它會使得菌體酶蛋白失去活性，代謝機能障礙而死亡。這種方法的缺點是醛蒸氣刺激性較大對人體有害，是致癌物質(zhì)，并且對呼吸道的刺激較大。具體可參照：每立方米加甲醛80ml：高錳酸鉀40g（2:1的比例），一定要先將高錳酸鉀倒入敞口容器，再加入40%的甲醛！密閉熏蒸24h左右，充分通風(fēng)（至少24h）在確保細胞房內(nèi)沒有甲醛的刺激性氣味后實驗人員才能進入。

安全提示：動作要迅速，兩者反應(yīng)較強烈，做好防護，注意不要濺到！甲醛遇到KMnO4會產(chǎn)生強烈的氧化反應(yīng)，濺出來是很危險的，所以一定要使用敞口容器！??！

兩者相比，甲醛熏蒸法效果更好，特別對于一些較難消除的真菌，但是由于甲醛的致癌性，不建議頻繁使用，可以結(jié)合紫外線照射法交替進行。

三、細胞房除菌劑

在進行紫外線照射或者甲醛熏蒸之前，需要對細胞間各個角落進行擦拭，愛必信細胞房清除劑，用于細菌、真菌清除，具有很強的抑菌功能，可用于細胞房的污染控制，通過清除細胞房內(nèi)細菌、真菌及其孢子，可有效防止細胞的污染。

圖4 細胞房除菌劑

使用方法：

1）直接對細胞房的死角、墻面、空間進行噴灑，也可倒出少許，將脫脂棉球浸泡后擦拭使用。 建議一周處理一次，配合紫外線使用效果更佳。
2）建議每立方米(m^3)使用量為5~8mL，如10m^2、高3m的房間推薦用量為150mL。遇污染爆發(fā)時期，如梅雨季節(jié)等，可適當(dāng)增加用量。若室內(nèi)墻壁上有霉菌生長，可噴灑于墻壁表面，或者用浸泡后的棉球擦拭。

溫馨提示：

1）操作時，穿戴適當(dāng)?shù)姆雷o服和手套操作；
2）處理后，人盡量遠離細胞培養(yǎng)室，待密封20~30 min 通風(fēng) 10min 后再使用；
3）避免直接接觸皮膚、眼睛，一旦接觸，應(yīng)立即用大量的清水沖洗，不要延誤。

圖5 實驗室清潔劑

[1] 劉水平,羅志勇.細胞培養(yǎng)室空氣消毒效果的檢測[J].生物醫(yī)學(xué)工程研究,2006(01):53-54.

今天的講解就到這里啦，感興趣的老師們可以公眾號“愛必信生物”后臺留言哦。

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