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            麗春紅染色液的配制與使用

            來(lái)源:上海遠(yuǎn)慕生物科技有限公司   2023年11月01日 11:28  

              麗春紅(Ponceau S)也稱猩紅,可以用于PVDF膜、硝酸纖維素膜(nitrocellulose membrane)和醋酸纖維素膜(cellulose acetate membrane)上的蛋白的檢測(cè)。麗春紅帶負(fù)電荷,可以與帶正電荷的氨基酸殘基結(jié)合,同時(shí)麗春紅也可以與蛋白的非極性區(qū)相結(jié)合,從而形成紅色的條帶。麗春紅染色的靈敏度不及考馬斯亮藍(lán)染色。

              麗春紅對(duì)蛋白的染色是可逆的,染色后可以用蒸餾水,PBS或其它適當(dāng)溶液洗去。因此,蛋白質(zhì)N端測(cè)序時(shí)將SDS-PAGE膠上的蛋白轉(zhuǎn)移到PVDF膜,用麗春紅染色后將目的條帶切下用于測(cè)序。

              注意:麗春紅染色液不適用于尼龍膜上的蛋白的檢測(cè)。

              麗春紅染色液的配制

              常用的麗春紅染色液有兩種:一種用乙酸配制,另外一種用三lv乙酸(TVA)和5-磺基水楊酸(5-Sulfosalicylic acid)配制。配制方法如下:

              一、用乙酸配制成分:0.1%(w/v)麗春紅,5%(v/v)乙酸,ddH2O。

              4 ℃保存,不要凍上。也可以配成“0.2%(w/v)麗春紅,3%(v/v)乙酸,ddH2O”。

              二、用三lv乙酸和5-磺基水楊酸成分:2% (w/v)麗春紅,30%的三lv乙酸,30%的5-磺基水楊酸。

              麗春紅染色液使用說(shuō)明

              將PVDF膜、硝酸纖維素膜或醋酸纖維素膜浸沒(méi)在麗春紅染色液中,搖動(dòng)5-10分鐘或更長(zhǎng)時(shí)間;取出印跡膜,用蒸餾水,PBS或其它適當(dāng)溶液漂洗2-3次,可出現(xiàn)清晰條帶,記錄結(jié)果;用蒸餾水,PBS或其它適當(dāng)溶液漂洗2-3次,每次3-5分鐘,去除麗春紅,進(jìn)行后續(xù)的WB檢測(cè)。

              補(bǔ)充:麗春紅染色液也可以直接用來(lái)染PAGE膠,不過(guò),在染色之前最好用甲醇-乙酸溶液浸泡一下PAGE膠,起到固定蛋白的作用。

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