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				2025版儀器采購(gòu)寶典電子書(shū)				
            
			
            
		
            
	
            
		
            
		
            
			
            化工儀器網(wǎng)>技術(shù)中心>選購(gòu)指南>正文
            
		
            
	
            
	
            
		
            
			
			
            
				
            
					
            
						
            
						
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            新品|T5核酸外切酶攜手無(wú)縫克隆，確保100%陽(yáng)性克隆率，讓實(shí)驗(yàn)更簡(jiǎn)單高效！
            
							
            
								來(lái)源：翌圣生物科技（上海）股份有限公司  
								2023年11月21日 09:10  
                                
    
    
    
        
							
            
						
            
						
            
							
            T5 Exonuclease是一種沿5'→3'方向降解DNA的核酸外切酶。它既能從DNA 5'末端起始消化，也可以從線(xiàn)性或環(huán)狀雙鏈DNA的缺口(gap)或缺刻(nick)處起始消化，但不會(huì)降解超螺旋雙鏈DNA。可應(yīng)用于無(wú)縫克?。ㄍ粗亟M克隆）、降解堿裂解提取質(zhì)粒中的變性DNA等。   

             
             圖1. T5 Exonuclease原理圖
             
             
            無(wú)縫克隆
             
            無(wú)縫克隆是目前常用于生物學(xué)研究的分子克隆技術(shù)，它基于DNA同源序列的互補(bǔ)配對(duì)，通過(guò)酶類(lèi)的介入，將這些互補(bǔ)配對(duì)的DNA片段連接起來(lái)，從而形成完整的雙鏈DNA。其組裝主要利用了T5 Exonuclease、Phusion高保真DNA聚合酶與Taq DNA連接酶之間的協(xié)同作用。這三個(gè)酶作用過(guò)程大致如下：
             
            • 切割：T5 Exonuclease從DNA片段的5'端切割一條鏈，產(chǎn)生DNA 3'突出末端。之后互補(bǔ)的DNA片段同源末端進(jìn)行退火配對(duì)結(jié)合，形成一個(gè)有間隙的環(huán)狀DNA；
            • 填補(bǔ)：Phusion DNA高保真DNA聚合酶通過(guò)DNA合成填補(bǔ)間隙，產(chǎn)生一個(gè)只有缺刻的環(huán)狀DNA；
            • 連接：Taq DNA連接酶通過(guò)形成磷酸二酯鍵修復(fù)缺刻，得到一個(gè)完整的雙鏈DNA，也就是完整的環(huán)狀質(zhì)粒。
             
            圖2. 無(wú)縫克隆原理圖[1]
             
             
             
            翌圣T5 Exonuclease
             
            翌圣T5 Exonuclease(Cat#14538ES)由翌圣鎂孚泰生物ZymeEditor酶進(jìn)化平臺(tái)經(jīng)過(guò)重組表達(dá)獲得，無(wú)切口酶殘留，應(yīng)用于無(wú)縫克隆，陽(yáng)性克隆率可達(dá)100%！
             
             
            部分?jǐn)?shù)據(jù)展示
             
            01
            應(yīng)用到無(wú)縫克隆，陽(yáng)性克隆100%
             
             
            使用T5 Exonuclease進(jìn)行無(wú)縫克隆，分別連接2、3、4個(gè)片段，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，翌圣T5 Exonuclease運(yùn)用到無(wú)縫克隆中，陽(yáng)性克隆率可達(dá)100%（12/12）。
             
            圖3. 無(wú)縫克隆效果圖
             
            02
            無(wú)切口酶殘留
             
             
            將30 U不同批次的T5 Exonuclease分別與相應(yīng)的底物DNA在37℃孵育4 h，瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)結(jié)果表明，翌圣T5 Exonuclease無(wú)切口酶殘留。
             
            圖4. 切口酶檢測(cè)
             
             
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            T5 Exonuclease
            14538ES
            Hieff Canace® Plus High-Fidelity DNA Polymerase 高保真DNA聚合酶
            10153ES
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