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            從人體血漿中提取酸性化合物的簡(jiǎn)便方式

            來(lái)源:杭州天釗科技有限公司   2011年12月12日 09:06  

            *,制藥領(lǐng)域中許多生物分析化合物都是堿性的,可以通過(guò)疏水性或陽(yáng)離子交換吸附劑輕易地提取。不過(guò),降脂他汀類(lèi)和抗炎藥卻大多是酸性的。使用傳統(tǒng)的疏水性方法無(wú)法提取這些酸性化學(xué)物。因此,安捷倫開(kāi)發(fā)出一種命名為Bond Elut Plexa PAX的新型聚合物強(qiáng)陰離子交換填料,專(zhuān)門(mén)用于簡(jiǎn)化該提取過(guò)程。

            圖 1. 使用安捷倫 Bond Elut Plexa PAX 從血漿中提取酸性藥物。放大 圖片

            簡(jiǎn)單通用的提取方法

            我們開(kāi)發(fā)了一種簡(jiǎn)單通用的方法,使用安捷倫 Bond Elut Plexa PAX 提取酸性化合物。為了評(píng)估該方法的性能,我們測(cè)定了吸附劑床的分析物回收率、提取樣品響應(yīng)的線(xiàn)性以及加標(biāo)血漿樣品分析的準(zhǔn)確性和度。

            由于方法的驗(yàn)證過(guò)程非常耗時(shí)并且需要準(zhǔn)確度*的數(shù)據(jù),因此只有速度快、回收率好、重現(xiàn)性高的固相萃?。⊿PE)方法才能令人滿(mǎn)意。如果能對(duì) SPE 過(guò)程進(jìn)行優(yōu)化且不損害數(shù)據(jù)完整性,便能夠簡(jiǎn)化和縮短方法的驗(yàn)證過(guò)程。Bond Elut Plexa 系列采用通用的方法,zui大程度縮減方法開(kāi)發(fā)過(guò)程,同時(shí)還提高了分析靈敏度和重現(xiàn)性。

            簡(jiǎn)便的流程

            我們使用安捷倫 Bond Elut Plexa PAX 96 孔板和2% NH4OH 、5% 甲酸進(jìn)行提取。圖 1 顯示了提取流程。將所有樣品蒸干,接著使用5 mM 80:20 的甲酸銨: CH3OH 水溶液定容至 100 µL。然后在安捷倫 325-MS LC/MS(采用 vESI 離子源)儀器上進(jìn)行液相色譜/質(zhì)譜分析。

            可重現(xiàn)的回收率

            我們通過(guò)測(cè)定分析物響應(yīng)并將其與加標(biāo)流動(dòng)相標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行比較來(lái)計(jì)算回收率。由于提取效率低、離子抑制效應(yīng)或未洗脫導(dǎo)致的分析物損耗均會(huì)體現(xiàn)在回收率上。盡管一些回收率在 50% 至 60% 的范圍內(nèi),但響應(yīng)是線(xiàn)性的,因?yàn)榉椒ǖ那€(xiàn)線(xiàn)性良好,準(zhǔn)確性高。所有藥物的回收率均高于 50%,且重現(xiàn)性良好,相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)低于 7%(表 1)。

            藥物

            回收率 %

            % RSD (n=6)

            阿托伐他汀

            62

            4.4

            雙氯芬酸

            52

            3.7

            速尿

            96

            6.1

            酮基布洛芬

            67

            2.3

            普伐他汀

            95

            3.4

               

            表 1.安捷倫 Bond Elut Plexa PAX 提取酸性藥物的回收率。

             

            圖 2.安捷倫 Bond Elut Plexa PAX 提取酸性藥物的回收線(xiàn)性良好。 放大 圖片

             

            圖 3. 安捷倫 Bond Elut Plexa PAX 從人體血漿中提取的 50 ng/mL 樣品的色譜分析結(jié)果。放大 圖片

            從 0.5 到 200 ng/mL 的線(xiàn)性良好(圖 2).選擇 50 ng/mL 的中點(diǎn)濃度測(cè)定校正曲線(xiàn)的準(zhǔn)確度 (表 2). zui后, 圖 3 顯示的樣品色譜結(jié)果展示了該方法有效性。

            藥物

            0.5 ng/mL

            50 ng/mL

            準(zhǔn)確度 (%)

            % RSD (n=8)

            準(zhǔn)確度 (%)

            % RSD (n=8)

            阿托伐他汀

            90

            11

            106

            11

            雙氯芬酸

            116

            14

            109

            6

            速尿

            99

            14

            95

            9

            酮基布洛芬

            104

            13

            108

            4

            普伐他汀

            108

            9

            96

            8

            表 2. 校正曲線(xiàn)的準(zhǔn)確度。

            Bond Elut Plexa PAX ——獲得較高回收率的簡(jiǎn)便方法

            上述結(jié)果表明,安捷倫 Bond Elut Plexa PAX 使用此簡(jiǎn)便方法提取酸性化合物異常簡(jiǎn)單。更好的是,該吸附劑對(duì)所有化合物都能提供較高的回收率,人體血漿中 0.5 至 200 ng/mL 的藥物樣品能夠獲得良好的線(xiàn)性。此外,校正曲線(xiàn)也呈線(xiàn)性,一階線(xiàn)性回歸的相關(guān)系數(shù)均大于 0.995。對(duì)于所有化合物而言,該方法準(zhǔn)確性高,重現(xiàn)性好,大多數(shù)結(jié)果都在實(shí)際值的 ±10% 以?xún)?nèi),RSD 低于 15%。

            全面了解安捷倫 Bond Elut解決方案。然后將安捷倫 Bond Elut Plexa PAX和固相萃取產(chǎn)品組合引入您的實(shí)驗(yàn)室。

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