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            細(xì)胞學(xué)堂 | 實(shí)驗(yàn)室細(xì)胞計(jì)數(shù)指南

            來源:武漢普諾賽生命科技有限公司   2023年12月19日 11:11  
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            細(xì)胞計(jì)數(shù)是實(shí)驗(yàn)室中常見的一項(xiàng)操作,用于確定樣品中細(xì)胞的數(shù)量,判斷細(xì)胞數(shù)量是否滿足實(shí)驗(yàn)需求。本期細(xì)胞學(xué)堂為大家整理了幾種常見的計(jì)數(shù)方法:人工手動(dòng)計(jì)數(shù)法、自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀法,以及懸浮細(xì)胞和貼壁細(xì)胞在不同密度下的鏡下視野的參考范圍,幫助您快速上手開展實(shí)驗(yàn)。




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            人工手動(dòng)計(jì)數(shù)法


            即通過肉眼觀察顯微鏡視野中的細(xì)胞數(shù)量,從而進(jìn)行統(tǒng)計(jì)。

              操作步驟   

            1

            將計(jì)數(shù)板及蓋玻片擦拭干凈,并將蓋玻片蓋在計(jì)數(shù)板上;

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            輕輕吹打細(xì)胞懸液,使細(xì)胞均勻分布;吸出10μL-20μL左右的細(xì)胞懸液滴在蓋片邊緣,使細(xì)胞懸液充滿蓋玻片和計(jì)數(shù)板之間;

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            靜置1min-2min,使細(xì)胞沉降;注意玻片下不要有氣泡,也避免細(xì)胞懸液進(jìn)入旁邊的槽中

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            在顯微鏡下對(duì)A/B/C/D四個(gè)大格內(nèi)的細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù),壓在大格四周邊線上的細(xì)胞只計(jì)數(shù)壓在2條邊線上的細(xì)胞(如左側(cè)和上方);若鏡下有2個(gè)細(xì)胞組成的細(xì)胞團(tuán),則應(yīng)按單個(gè)細(xì)胞計(jì)算;若細(xì)胞團(tuán)數(shù)量較多,占細(xì)胞總量的10%左右,則說明細(xì)胞分散不好會(huì)導(dǎo)致計(jì)算不準(zhǔn)確,需要重新制備細(xì)胞懸液,細(xì)胞量較多的時(shí)候,需要借助計(jì)數(shù)器;

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            按公式計(jì)數(shù)細(xì)胞數(shù)量:細(xì)胞數(shù)/mL=四個(gè)大格內(nèi)細(xì)胞總數(shù)(每個(gè)大格共計(jì)16個(gè)小格)×104/4。


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            自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀法


            即通過儀器進(jìn)行計(jì)數(shù),例如血細(xì)胞計(jì)數(shù)儀或顯微鏡配備的圖像分析系統(tǒng)。這些設(shè)備能夠自動(dòng)識(shí)別和計(jì)數(shù)細(xì)胞,提高計(jì)數(shù)的準(zhǔn)確性和效率。

              操作步驟   

            1

            將計(jì)數(shù)板及蓋玻片擦拭干凈,并將蓋玻片蓋在計(jì)數(shù)板上;

            2

            輕輕吹打細(xì)胞懸液,使細(xì)胞均勻分布;吸出少許細(xì)胞懸液滴在蓋片邊緣,使細(xì)胞懸液充滿蓋玻片和計(jì)數(shù)板之間;

            3

            靜置1min-2min,使細(xì)胞沉降;注意蓋玻片下不要有氣泡,也避免細(xì)胞懸液進(jìn)入旁邊的槽中

            4

            將計(jì)數(shù)板放置在儀器中,按要求設(shè)置參數(shù),儀器自動(dòng)計(jì)數(shù);

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            基于鏡下密度估計(jì)細(xì)胞密度


            在實(shí)際細(xì)胞培養(yǎng)過程中,若沒有計(jì)數(shù)條件或者對(duì)于細(xì)胞數(shù)量不要求定量,也可基于肉眼去觀察鏡下的細(xì)胞密度去估計(jì)細(xì)胞是否可以傳代。以下是懸浮細(xì)胞和貼壁細(xì)胞不同密度下的鏡下視野可以給大家作為參考。(需要注意的是,不同大小的細(xì)胞,密度值是有差異的,這里列舉的是較常見的例子)

              01 貼壁細(xì)胞的密度參考     

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            顯微鏡下不同密度的貼壁細(xì)胞

              02 懸浮細(xì)胞的密度參考     

            懸浮細(xì)胞接種到T25的瓶子里混勻后,在顯微鏡下靜置3min-5min后,拍照得到:(懸浮細(xì)胞在移動(dòng)的時(shí)候,細(xì)胞會(huì)像向中間移動(dòng),導(dǎo)致密度不均)

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            K562細(xì)胞混勻靜置3~5分鐘后拍照(100X拍攝)


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            K562細(xì)胞混勻靜置3~5分鐘后拍照(200X拍攝)






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