反轉(zhuǎn)錄是將RNA轉(zhuǎn)錄成互補(bǔ)DNA (cDNA) 的過(guò)程，該反應(yīng)由反轉(zhuǎn)錄酶介導(dǎo)完成。在有退火引物的情況下，反轉(zhuǎn)錄酶首先與 RNA 模板結(jié)合。反轉(zhuǎn)酶的RNA依賴(lài)性 DNA 聚合酶活性通過(guò)摻入反應(yīng)混合物中的dNTP來(lái)合成cDNA，反應(yīng)生成得到 cDNA:RNA 雜合鏈，此過(guò)程被稱(chēng)為第一鏈 cDNA 合成。

莫洛尼鼠白血病病毒 (M-MLV) 反轉(zhuǎn)錄酶是分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)流程中常見(jiàn)的反轉(zhuǎn)錄酶之一。為了獲得更高的反轉(zhuǎn)錄效率、更好的熱穩(wěn)定性和更高的 cDNA 合成率，通常會(huì)對(duì)原始的反轉(zhuǎn)錄酶進(jìn)行基因工程改造。目前市面上的反轉(zhuǎn)錄試劑所需要的反轉(zhuǎn)錄時(shí)間普遍從15分鐘到30分鐘不等，時(shí)間相對(duì)較長(zhǎng)，當(dāng)反應(yīng)樣本量較大時(shí)，整體花費(fèi)時(shí)間量也會(huì)急劇上升。翌圣生物現(xiàn)有的5分鐘反轉(zhuǎn)錄系列產(chǎn)品，在5分鐘內(nèi)即可完成反轉(zhuǎn)錄，省時(shí)高效。

5分鐘一步消化&反轉(zhuǎn)錄預(yù)混液(Cat #11151ES)

圖. 以人293T細(xì)胞RNA為模板，分別檢測(cè)三種基因。品牌A、品牌B、品牌C均為一步gDNA去除&反轉(zhuǎn)錄試劑。測(cè)試結(jié)果顯示，在1 μg和10 ng Total RNA 投入下，11151ES反轉(zhuǎn)錄的產(chǎn)量均優(yōu)于其他品牌，Ct值更小。

圖. 以擬南芥RNA為模板，品牌A、品牌B、品牌C均為一步gDNA去除&反轉(zhuǎn)錄試劑。測(cè)試結(jié)果顯示，在1 μg和10 ng Total RNA 投入下，11151ES反轉(zhuǎn)錄的產(chǎn)量均優(yōu)于其他品牌，Ct值更小。

圖. 以人293T細(xì)胞RNA為模板，擴(kuò)增30%GC、50%GC、60%GC和70%GC的基因。分別投入100 pg、1 ng、10 ng、100 ng、1 μg的Total RNA進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄并進(jìn)行熒光定量檢測(cè)。結(jié)果顯示，11151ES可滿(mǎn)足100 pg-1 μg RNA的反轉(zhuǎn)錄。

圖.以人293T細(xì)胞RNA為模板進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄，將獲得的cDNA產(chǎn)物進(jìn)行反復(fù)凍融，分別凍融10次、20次、30次。測(cè)試結(jié)果顯示11151ES反轉(zhuǎn)錄得到的cDNA產(chǎn)物在30次反復(fù)凍融處理后，仍保持高度的穩(wěn)定性，Ct值差異不大。

圖. 以人293T細(xì)胞RNA為模板進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄，將獲得的cDNA產(chǎn)物在-20℃、4℃、25℃和37℃的溫度條件下放置7天。測(cè)試結(jié)果顯示11151ES反轉(zhuǎn)錄得到的cDNA產(chǎn)物在不同溫度下存儲(chǔ)7天，仍保持高度的穩(wěn)定性，Ct值差異不大。

樣本來(lái)源：人肝臟組織總RNA

樣本來(lái)源：胃黏膜細(xì)胞RNA

樣本來(lái)源：小鼠胰島素瘤細(xì)胞RNA

5分鐘快速反轉(zhuǎn)錄試劑盒(11149/11150ES)

圖. 以293T細(xì)胞總RNA為模板，使用11149ES進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄，得到的cDNA 進(jìn)行qPCR 定量分析。結(jié)果顯示，不同反轉(zhuǎn)錄時(shí)間處理的Ct值差值在0.2之內(nèi)。說(shuō)明產(chǎn)品可在5分鐘內(nèi)完成反轉(zhuǎn)錄，反轉(zhuǎn)效果和長(zhǎng)時(shí)間反轉(zhuǎn)效果持平。

圖. 以293T細(xì)胞總RNA為模板，使用11149ES進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄，得到的cDNA 進(jìn)行qPCR 定量分析。結(jié)果顯示，RNA 投入量為10 pg-1 μg時(shí)，11149ES均可反轉(zhuǎn)成功，保證定量結(jié)果。

圖. 以293T細(xì)胞總RNA為模板，使用11149ES進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄，將得到的cDNA進(jìn)行PCR檢測(cè)。結(jié)果顯示，11149ES能夠滿(mǎn)足合成1 kb-14 kb長(zhǎng)度的cDNA, 后續(xù)PCR有一定的適用場(chǎng)景。若需要直接反轉(zhuǎn)出10kb以上的片段，建議延長(zhǎng)反轉(zhuǎn)錄時(shí)間至20-30分鐘，以保證最終片段的獲取。

圖. 以293T細(xì)胞總RNA為模板，使用11149ES、進(jìn)口A品牌進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄，其中11149ES不進(jìn)行g(shù)DNA去除步驟，將得到的cDNA 進(jìn)行qPCR 定量分析。結(jié)果顯示，進(jìn)口A品牌反轉(zhuǎn)時(shí)間為13分鐘， 11149ES反轉(zhuǎn)時(shí)間為5分鐘，不同產(chǎn)物定量顯示，11149ES的Ct更小或者接近進(jìn)口競(jìng)品，說(shuō)明11149ES 5分鐘反轉(zhuǎn)效率優(yōu)于或近似進(jìn)口A品牌的反轉(zhuǎn)錄效率。

圖. 以293T細(xì)胞總RNA為模板，使用11149ES、進(jìn)口B品牌進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄，其中11149ES不進(jìn)行g(shù)DNA去除步驟，得到的cDNA 進(jìn)行qPCR 定量分析。結(jié)果顯示，進(jìn)口B品牌反轉(zhuǎn)時(shí)間為20分鐘，11149ES反轉(zhuǎn)時(shí)間為5分鐘，不同量底物定量顯示，11149ES的Ct更小或者接近進(jìn)口B品牌，說(shuō)明11149ES 5分鐘反轉(zhuǎn)效率優(yōu)于或近似進(jìn)口B品牌的反轉(zhuǎn)錄效率。

樣本來(lái)源：菊花葉片

客戶(hù)評(píng)價(jià)：與某進(jìn)口品牌效果相似，擴(kuò)增常規(guī)大小的片段效果不錯(cuò)。

樣本來(lái)源：果*葉片

客戶(hù)評(píng)價(jià)：藍(lán)色很好看。

樣本來(lái)源：水稻

客戶(hù)評(píng)價(jià)：與其他反轉(zhuǎn)錄試劑盒相比，節(jié)省加樣時(shí)間，節(jié)省反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)時(shí)間（其他試劑盒需要15+2 min，本試劑盒只需5 min），后續(xù)基因克隆DNA電泳結(jié)果證明，本試劑盒反轉(zhuǎn)效率更高，條帶更亮，所以會(huì)更節(jié)省PCR使用試劑，節(jié)省成本。