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脫鈣是制作骨組織切片的重要環(huán)節(jié)，尤其是要進(jìn)行免疫組織化學(xué)染色的骨組織。為達(dá)到骨組織既充分脫鈣，又保護(hù)骨組織中的抗原不被破壞，需要對(duì)含鈣的組織固定之后再進(jìn)行脫鈣，然后再行常規(guī)制片Chemicalbook。DTA脫鈣液與羥基磷灰石結(jié)晶的外層鈣結(jié)合，形成可溶性的非離子化合物，同時(shí)又促進(jìn)晶體內(nèi)層的結(jié)合鈣向外轉(zhuǎn)移。借助這種連續(xù)性的作用使羥基磷灰石晶體逐漸融解，且pH中性時(shí)可起螯合作用。
EDTA脫鈣液的操作步驟：
1、骨組織脫鈣時(shí)，取材不易過厚，一般大約 5mm。
2、組織固定后，用 PBS 清洗 3 次，每次 20min。
3、組織用蒸餾水洗清洗 3 次，每次 20min。
4、組織轉(zhuǎn)移 20～30 倍體積的 EDTA脫鈣液中，脫鈣 10～30 天或更長(zhǎng)時(shí)間。如果想加快脫鈣速度，可以置于 37℃進(jìn)行脫鈣。如果必要，更換新的 EDTA 脫鈣液繼續(xù)脫鈣，多數(shù)組織脫鈣 2 周～3 個(gè)月即可，每周更換一次，直終點(diǎn)。亦可采用微波快速脫鈣法：微波爐設(shè)在 200W 左右的檔位，每次加熱 5min，依據(jù)組織厚度和密度重復(fù) 3～5min，中間間隔 3～5min。
5、用蒸餾水沖洗數(shù)次。
6、常規(guī)脫水、包埋。
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