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提起細胞培養(yǎng)，相信很多老師都遇到過培養(yǎng)液中的“小黑點”，因無法確定它的身份而頭痛不已。本期細胞學堂將為大家揭秘這些黑點究竟是什么，幫助您快速上手開展實驗。
01
血清沉淀
血清在融解過程中會產(chǎn)生大量的析出物，呈現(xiàn)出小顆粒樣的東西，甚至呈纖維樣，這是由于血清融解后導致的蛋白、鹽類物質(zhì)的析出。
血清融解時混勻 血清靜置融解不混勻，出現(xiàn)黑點
顯微鏡下的血清沉淀物
影響因素
通常血清析出物的多少與融解方法有關(guān)。通過4℃冰箱解凍和溶解過程持續(xù)搖晃混勻，可以有效避免沉淀產(chǎn)生，而37℃靜置混勻則會有較多沉淀物析出。
處理方法
血清沉淀產(chǎn)生后應(yīng)離心去除部分沉淀，否則在培養(yǎng)細胞時會看到較多黑點和雜質(zhì)類物質(zhì)，影響判斷。
02
細胞碎片或者分泌物
在細胞代謝過程中，細胞凋亡后會產(chǎn)生一些分泌物的沉積和碎片物質(zhì)，在顯微鏡下呈黑點狀。
顯微鏡下的細胞碎片及分泌物
特征
①
細胞碎片大小不均一，會隨著培養(yǎng)時間少量增多，但是不會呈倍增的趨勢增多；
②
細胞狀態(tài)差時碎片會較多，狀態(tài)變好后黑點減少；
③
細胞分泌物情況根據(jù)細胞有區(qū)別，有的細胞不產(chǎn)生分泌物，有的細胞會有較多的分泌物，往往是不影響細胞形態(tài)和增殖速度。
03
外源微生物污染
當細胞被支原體、黑膠蟲或者細菌污染時，往往也會產(chǎn)生很多小黑點，尤其是細菌污染的情況出現(xiàn)時，這些小黑點甚至會導致培養(yǎng)液渾濁。
細胞支原體污染，黑點較多
細胞加入支原體清除試劑第二天，黑點顯著變少
如何區(qū)分是否為污染？
1
外源微生物污染
支原體和黑膠蟲污染一般表現(xiàn)為黑點增多并伴隨細胞生長速度變慢、死細胞增多等現(xiàn)象，通常加入對應(yīng)清除試劑后細胞狀態(tài)會有顯著改善。
2
細胞分泌物/細胞碎片
細胞分泌物和細胞碎片則不會因為加入清除試劑后而改善，會持續(xù)存在且不影響細胞增長。
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