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核酸質(zhì)控作為分子生物學(xué)最基礎(chǔ)的實(shí)驗(yàn)之一，核酸定量的準(zhǔn)確與否直接決定著下游實(shí)驗(yàn)的結(jié)果。目前市面上在用的核酸定量方法主要是紫外光吸收法和Qubit熒光染料法。
紫外光吸收法利用分光光度計(jì)測(cè)定260nm處的吸光度，對(duì)DNA和RNA進(jìn)行定量。與此同時(shí)，還能通過計(jì)算OD260/OD280估計(jì)核酸的純度，但檢測(cè)數(shù)值極易受到其他污染物(如游離核苷酸、鹽和有機(jī)化合物)的影響。
Qubit熒光染料法利用熒光染料特異地與雙鏈DNA、單鏈DNA、RNA或蛋白質(zhì)相結(jié)合，并在特定波長(zhǎng)光源的激發(fā)下，發(fā)出熒光，并不受樣本中可能存在的其他雜質(zhì)分子影響，熒光強(qiáng)度與樣品中的靶分子濃度相對(duì)應(yīng)。
表1.核酸定量主流方法比較
紫外吸收法與qubit熒光法定量各有優(yōu)勢(shì)，互相配合。針對(duì)常規(guī)核酸樣本初步定量濃度純度和是否存在污染物等信息可選擇吸光度法定量，Qubit定量更適合低濃度的珍貴樣品或需要精確定量的下游實(shí)驗(yàn)，如二代測(cè)序、熒光定量PCR等。
翌圣已推出多款Qubit定量產(chǎn)品：dsDNA HS Assay Kit for Qubit®（Cat#12640）、預(yù)混即用型1×dsDNA HS Assay Kit for Qubit®(Cat#12642）、單鏈DNA定量試劑盒ssDNA Assay Kit for Qubit®（Cat#12645）和dsDNA BR Assay Kit（Cat#12643），自上市以來好評(píng)。
即用型dsDNA定量預(yù)混液--1×dsDNA HS Assay Kit for Qubit®
操作簡(jiǎn)便：即用型預(yù)混液，無需預(yù)混；
高靈敏度：檢測(cè)濃度低至50 pg/μL；
穩(wěn)定性好：熒光信號(hào)持續(xù)3 h，常溫放置20 d不影響定量準(zhǔn)確性；
A.強(qiáng)穩(wěn)定性：室溫存放2周仍保持穩(wěn)定（測(cè)定值與理論值偏差<10%）
表2.對(duì)比競(jìng)品，不同樣本4℃和室溫穩(wěn)定性測(cè)試
B. 靈敏度高，批間穩(wěn)定性良好
表3.不同批次穩(wěn)定性測(cè)試
寬范圍dsDNA定量--dsDNA BR Assay Kit
高靈敏度：檢測(cè)濃度低至50 pg/μL；
線性關(guān)系表現(xiàn)佳：2-1000 ng范圍內(nèi)，線性關(guān)系良好
污染物耐受性強(qiáng)：可耐受常見污染物。
表4.對(duì)比競(jìng)品，標(biāo)準(zhǔn)品穩(wěn)定性和耐受污染物測(cè)試
ssDNA定量的理想之選——高性價(jià)比ssDNA Assay Kit for Qubit®
高靈敏度：檢測(cè)濃度低至50 pg/μL；
線性關(guān)系表現(xiàn)佳：0-200 ng范圍內(nèi)，線性關(guān)系良好；
信號(hào)穩(wěn)定：優(yōu)異的染料加上升級(jí)優(yōu)化的Buffer，可室溫下維持穩(wěn)定的熒光強(qiáng)度，在常見污染，如鹽、自由核苷酸、溶劑、去污劑或蛋白質(zhì)等環(huán)境下仍有很強(qiáng)的適用性，定量準(zhǔn)確；
穩(wěn)定性好：4℃、25℃處理6個(gè)月，性能無明顯變化；
應(yīng)用范圍廣：使用操作流程簡(jiǎn)單，實(shí)現(xiàn)寡聚核苷酸、引物、變性DNA、單鏈環(huán)狀DNA等的快速定量。
A. 重復(fù)性好：在不同的Qubit儀器中進(jìn)行定量，不同類型的樣品使用翌圣多個(gè)批次的Cat#12645測(cè)試。0-200ng范圍內(nèi)，不同Qubit儀器測(cè)量重復(fù)性好。
圖1.不同批次在不同qubit儀器穩(wěn)定性測(cè)試
B.穩(wěn)定性良好：標(biāo)準(zhǔn)品和1×工作液穩(wěn)定性測(cè)試，37℃放置10天，熒光信號(hào)穩(wěn)定。長(zhǎng)期穩(wěn)定性監(jiān)測(cè)25℃儲(chǔ)存6個(gè)月，產(chǎn)品性能于4℃對(duì)照一致。
表5. 標(biāo)準(zhǔn)品和待測(cè)樣本穩(wěn)定性測(cè)試
定量準(zhǔn)確：檢測(cè)試劑擴(kuò)增效率高，特異性好，在0.0002 pM～20 pM范圍內(nèi)均有很好的線性關(guān)系；
儀器兼容性廣：兼容常規(guī)定量平臺(tái)，如Bioer平臺(tái)、Bio-Rad平臺(tái)和ABI 7500平臺(tái)；
穩(wěn)定性好：4℃、25℃處理6個(gè)月，性能無明顯變化。
圖2.不同廠家文庫(kù)定量試劑定量情況
翌圣定量產(chǎn)品經(jīng)過嚴(yán)格的出廠質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)，保證穩(wěn)定準(zhǔn)確定量，讓您定量無憂！
表6. 翌圣NGS定量產(chǎn)品選擇指南
產(chǎn)品類別 | 產(chǎn)品名稱 | 貨號(hào) | 定量范圍 |
dsDNA HS | dsDNA HS Assay Kit for Qubit® | 12640ES | 0.2-100 ng； 10 pg/µL-100 ng/µL |
Picogreen dsDNA Quantitation Reagent 雙鏈DNA（dsDNA）定量試劑 | 12641ES | ||
1×dsDNA HS Assay Kit | 12642ES | ||
dsDNA BR | dsDNA BR Assay Kit | 12643ES | 2-1000 ng； 0.1 ng/µL-1000 ng/µL |
ssDNA qubit | ssDNA Assay Kit for Qubit® | 12645ES | 1–200ng； 50 pg/μL-200 ng/μL |
qPCR法文庫(kù)定量 | Hieff NGS® Library Quantification Kit for Illumina, qPCR Master Mix | 12302ES | 定量預(yù)混液 |
Hieff NGS® Library Dilution Buffer | 12303ES | 文庫(kù)稀釋液 | |
Hieff NGS® Library Quantification Kit for Illumina, DNA Standard (1-6) | 12307ES | 定量標(biāo)準(zhǔn)品 |
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