什么是elisa試劑盒？elisa是一種免疫學實驗操作實驗，中文名字叫酶聯(lián)免疫吸附測定實驗。酶聯(lián)免疫吸附實驗（elisa）是一種用來定量檢測樣本中的某種抗原方法。因此，因此在許多研究和檢測領域中使用 ELISA 來檢測和定量各種樣本類型中的抗原，如使用 ELISA 分析細胞裂解物、血樣、食品等特定物質(zhì)。常見檢測領域包括如生物學、醫(yī)學、農(nóng)學等。

Elisa試劑盒原理

酶聯(lián)免疫吸附實驗（elisa）是一種高敏度的定量實驗，通常用于測量生物樣品中分析物的濃度，如細胞因子和抗體。這種方法的一般原理包括三個步驟：

首先是將目標分析物捕獲或固定在微孔板上，然后用目標特異性檢測蛋白檢測分析物，最后就是酶反應，既共軛酶將底物轉(zhuǎn)化為有色產(chǎn)物。根據(jù)不同的捕獲方法和檢測方法，elisa可以分為四種方法。

elisa方法

ELISA有四種主要的方法：直接法、間接法、夾心法和競爭法。每種類型的描述如下，并用圖說明了分析物和抗體是如何結(jié)合和使用的。

1.直接法（酶標抗體結(jié)合抗原）

待測抗原粘附在微孔板的孔內(nèi)，然后使用帶酶標的一抗與抗原結(jié)合，最后加入底物進行顯色，并檢測吸光度。由于吸光度的大小與抗原體復合物的數(shù)量成一定的線性關系。因此，也就間接的實現(xiàn)了測定抗原數(shù)量的目標。

2.間接法（一抗結(jié)合抗原，酶標二抗結(jié)合一抗）

和直接法的區(qū)別在于兩種抗體代替一種抗體，結(jié)合抗原的抗體（一抗）不帶酶標記物，當抗原和抗體結(jié)合后，再使用帶酶標的二抗結(jié)合一抗，加入底物顯色并檢測。

3.夾心法（捕獲抗體和一抗結(jié)合抗原，酶標二抗結(jié)合一抗）

在間接法基礎上又再發(fā)展出更為復雜的夾心法，它在微孔底部預先包被一種捕獲抗體，用于結(jié)合抗原，在這個復合物的基礎上再結(jié)合一抗、二抗并檢測。

?4.競爭法（酶標抗原和抗原競爭結(jié)合抗體）
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??無法同時結(jié)合捕獲抗體和一抗的話，就不適合用夾心檢測。此時可以在微孔板孔內(nèi)包被抗體，同時提供帶標記的同種抗原，把待檢測抗原和標記抗原一起加入和抗體結(jié)合，由于兩者會競爭結(jié)合抗體，所以最終檢測的信號越高，證明代測抗原越少，反之則越多。

?Elisa試劑盒檢測步驟

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??ELISA 是最jian單的血液檢測之一。它快速、快捷，并且需要患者的血液樣本。ELISA的整個過程如下所述。
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??抗體附著在作為固體表面的聚苯乙烯板上，并被細菌、其他抗體和激素吸引或具有親和力。
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??將抗原-抗體混合物填充到包被有抗原的微量滴定板上，然后通過洗滌除去游離抗體。
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??添加對一抗具有特異性的二抗，該二抗通常與酶結(jié)合。
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??通過清洗板去除游離的酶聯(lián)二抗。
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??最后，添加底物。底物被酶轉(zhuǎn)化形成有色產(chǎn)物，可以通過分光光度法進行測量。
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??通過ELISA檢測表明懷孕的HCG蛋白。將血液或尿液樣本和與酶連接的純化 HCG 組合添加到系統(tǒng)中。如果測試樣品中不存在 HCG，則只有連接的酶與固體表面結(jié)合。
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??感興趣的物質(zhì)越多，發(fā)生的反應就越多，與固體表面結(jié)合的連接酶就越少。這些反應通常通過溶液顏色的變化來指示。

?Elisa試劑盒的優(yōu)點

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??以下是 ELISA 技術的一些優(yōu)點：
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??由于使用了兩種抗體，從 ELISA 獲取的結(jié)果可以準確診斷特定疾病。
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??可以對復雜的樣品進行檢測，因為不需要純化抗原即可檢測。
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??由于可以進行直接和間接分析方法，因此反應靈敏。
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??這是一個快速測試，很快就能得出結(jié)果。
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??ELISA 的可能檢測范圍包括定量、半定量、標準曲線、定性、校準曲線模型等。
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??與需要放射性物質(zhì)存在的其他測定相比，更容易執(zhí)行且過程簡單。
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??elisa試劑盒是用來檢測什么的

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??Elisa檢測如下：
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??可以確定樣品中抗體和抗原的存在。
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??它在食品工業(yè)中用于檢測存在的任何食品過敏原。
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??測定病毒測試中血清抗體的濃度。
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??在 疾病爆發(fā)期間，為了評估疾病的傳播，例如在最近的 CO VID-19 爆發(fā)期間，正在使用快速檢測試劑盒來確定血液樣本中是否存在抗體。
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??ELISA常見問題解答

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??1. 試劑盒從冰箱拿出后未充分平衡室溫，會有什么影響？
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??如果試劑盒從冰箱中拿出后未充分平衡至室溫（20～25℃），可能會導致溫育時間不夠，從而使OD值偏低。
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??2. 移液器吸液量不足或吸頭內(nèi)壁不清潔，會造成什么后果？
??
??移液器吸液量不足或吸頭內(nèi)壁不清潔，都可能導致加樣量不足，造成OD值偏低。此外，吸頭內(nèi)壁不清潔還可能導致非特異性吸附，進一步影響實驗結(jié)果。
??
??3. 操作順序顛倒或遺漏步驟，會有什么后果？
??
??如果操作順序顛倒或遺漏步驟，很可能導致實驗失敗，例如漏加酶結(jié)合物、顯色劑等，使整塊ELISA板都不顯色。
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??4. 溫育時間不夠或溫育溫度未達到要求，會有什么影響？
??
??溫育時間不夠或溫育溫度未達到要求，都會影響反應的進行，導致OD值偏低。例如，保溫用的濕盒沒有預溫，或培養(yǎng)箱溫度不符合操作要求等。
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??5. 洗板液在配置過程中出現(xiàn)問題，會造成什么后果？
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??洗板液在配置過程中出現(xiàn)問題，如量筒不干凈、含有酶抑制物、濃度過高等，都可能導致洗去特異性結(jié)合物，使OD值偏低。
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??6. 洗板時沖擊力太大、浸泡時間過長、洗板次數(shù)過多，會有什么影響？
??
??這些操作都可能導致洗去結(jié)合在包被板的特異性結(jié)合物，從而使OD值偏低。
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??7. 加完終止液后沒有輕輕充分混勻ELISA板液就立即讀數(shù)或放置太久才進行讀數(shù)，會有什么影響？
??
??這可能導致檢測OD值偏低或偏高。一般建議在加完終止液后3分鐘之內(nèi)進行讀數(shù)。
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??8. 酶標儀檢測波長設定有誤，會有什么后果？
??
??如果酶標儀檢測波長設定有誤，例如選用的波長不是產(chǎn)物的敏感吸收峰，可能會導致OD值偏低或偏高。
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??9. 陰性對照出現(xiàn)陽性結(jié)果，可能的原因是什么？
??
??陰性對照出現(xiàn)陽性結(jié)果可能是由于樣品、試劑被污染，或加樣時操作不當導致相鄰孔之間溶液濺灑出現(xiàn)交叉污染。此外，抗體量過多導致非特異性結(jié)合也可能是一個原因。
??
??10. 酶標板整體背景高，可能的原因是什么？
??
??酶標板整體背景高可能是由于底物孵育過程沒有避光，導致背景信號增強。
??
??11. 復孔之間重復性差，可能的原因是什么？
??
??復孔之間重復性差可能是由于加樣本及試劑量不準、孔間不一致等原因造成的。此外，操作條件、人員等的不一致也可能導致重復性差。
??
??12. 陽性對照值偏低或低吸光度，可能的原因是什么？
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??陽性對照值偏低或低吸光度可能是由于溫育的時間或溫度不夠、顯色反應時間太短、顯色液變質(zhì)或試劑過期、試劑稀釋有誤等原因造成的。