細胞電轉(zhuǎn)實驗的主要影響因素有哪些？

來源：臺州賽瑞崔克生物技術(shù)有限公司 2024年05月10日 08:55

1、細胞密度對電轉(zhuǎn)的影響

細胞系電轉(zhuǎn)的細胞密度最好在0.5M-2.0M/20ul，或2.5M-10M/100ul. 常用1M/20ul. PBMC直徑更小，細胞密度一般為1M-5M/20ul, 或5M-25M/100ul。細胞密度越高可以增加細胞間電流輔助，從而增加細胞的有效電轉(zhuǎn)面積。密度高時電壓需要稍微調(diào)高一些，所以電轉(zhuǎn)時細胞密度根據(jù)實驗需要選定后盡量不要變化。

需要特別注意的地方：一個樣品加進電擊管后，不要等候，馬上進行電轉(zhuǎn)，完成后再處理下一個樣品，不要把一批樣品全部加樣完成后再一起電轉(zhuǎn)。等候時間過長，細胞沉降也會導致電擊管內(nèi)上下細胞密度不均勻而降低電轉(zhuǎn)效率。電轉(zhuǎn)完成后細胞可以馬上取出培養(yǎng)，也可以等全部樣品處理完畢再取出培養(yǎng)。

2、細胞聚團對電轉(zhuǎn)的影響

當細胞聚團時，其中只有一側(cè)細胞可以被電轉(zhuǎn)，中間和另一側(cè)細胞不能被電轉(zhuǎn)，降低電轉(zhuǎn)效率。所以消化細胞過程中注意細胞不要成團。

3、溫度對電轉(zhuǎn)的影響

溫度對電轉(zhuǎn)影響也很大。一般室溫（23度）適宜進行電轉(zhuǎn)實驗。溫度越低，需要電壓越高。4度電轉(zhuǎn)比室溫23度電轉(zhuǎn)大概需要增加3%到5%的電壓。所以為保證電轉(zhuǎn)實驗結(jié)果可重復性，需要將每次的電轉(zhuǎn)溫度保持一致。

4、DNA質(zhì)量對電轉(zhuǎn)的影響

DNA越純凈，越有利于電轉(zhuǎn)。DNA中雜質(zhì)較多時，細胞毒性大，非常不利于電轉(zhuǎn)。市場上在售的品牌質(zhì)粒提取試劑盒一般都可以。DNA加得比較多時，電轉(zhuǎn)效率呈線性遞增。但是電轉(zhuǎn)時DNA加的過高也會產(chǎn)生細胞毒性，電壓需要稍微下調(diào)。所以DNA濃度應(yīng)根據(jù)實驗需要相應(yīng)調(diào)整，濃度范圍一般在10ug/ml-200ug/ml。

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