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細(xì)胞電轉(zhuǎn)參數(shù)的相關(guān)問題
是否每一個(gè)細(xì)胞都有特定的參數(shù)？
不是。即使是同一個(gè)細(xì)胞，電轉(zhuǎn)實(shí)際上也沒有單一的參數(shù)，需要根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要的細(xì)胞密度以及溫度和DNA情況加以預(yù)先測(cè)試。
另外，同樣的細(xì)胞在不同的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)條件下可能需要不同的參數(shù)，因此本網(wǎng)站有推薦參數(shù)供客戶參考。對(duì)于沒有推薦參數(shù)的細(xì)胞，可以選擇類似直徑的細(xì)胞參數(shù)進(jìn)行測(cè)試。
為什么每次同樣的細(xì)胞進(jìn)行電轉(zhuǎn)，有的時(shí)候結(jié)果不一樣？
很多客戶在剛剛接觸電轉(zhuǎn)實(shí)驗(yàn)的時(shí)候都會(huì)遇到這個(gè)問題，因?yàn)橛绊戨娹D(zhuǎn)效果的因素有很多，比如：細(xì)胞密度、溫度、DNA質(zhì)量等。我們都會(huì)建議客戶在首次做一個(gè)新的細(xì)胞電轉(zhuǎn)時(shí)可以從推薦的參數(shù)出發(fā)來做個(gè)簡(jiǎn)單GFP測(cè)試找到合適的參數(shù)。
初次實(shí)驗(yàn)建議按照推薦電壓上下隔20V測(cè)試，盡量把預(yù)先測(cè)試的實(shí)驗(yàn)條件控制得與正式實(shí)驗(yàn)一致，比如測(cè)試的時(shí)候細(xì)胞密度、培養(yǎng)方式、質(zhì)粒用量等。另外，同樣的細(xì)胞在不同的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)條件下可能需要不同的參數(shù)，因此推薦參數(shù)僅供參考。通常GFP熒光在電轉(zhuǎn)1-3個(gè)小時(shí)后可通過顯微鏡進(jìn)行觀察，過夜培養(yǎng)后熒光表達(dá)更強(qiáng)。
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