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Celetrix細(xì)胞電轉(zhuǎn)方案說明
Celetrix電轉(zhuǎn)幾乎不挑細(xì)胞種類，都可以達(dá)到高效率。有一部分細(xì)胞種類，由于其本身具有的性質(zhì)，在電轉(zhuǎn)時(shí)需要特別注意采用合適的方案。
單核細(xì)胞和巨噬細(xì)胞相關(guān)的細(xì)胞系，有些電轉(zhuǎn)質(zhì)粒后細(xì)胞會(huì)在兩三天內(nèi)幾乎全部死亡。THP-1，U937，HL-60和Molm13等細(xì)胞電轉(zhuǎn)質(zhì)粒后會(huì)死亡。其他老式的電轉(zhuǎn)儀電轉(zhuǎn)質(zhì)粒到這些細(xì)胞后會(huì)有部分細(xì)胞存活，是因?yàn)槠渲杏泻芏鄾]有電轉(zhuǎn)成功的細(xì)胞活下來了，對(duì)于電轉(zhuǎn)沒有什么意義。
Celetrix專門開發(fā)了試劑盒可以幫助單核細(xì)胞類的細(xì)胞系進(jìn)行質(zhì)粒電轉(zhuǎn)，目前驗(yàn)證過THP-1和U937細(xì)胞轉(zhuǎn)入質(zhì)粒后部分細(xì)胞可以存活生長(zhǎng)，從而使難做的細(xì)胞株穩(wěn)轉(zhuǎn)變得很簡(jiǎn)單。下圖所示THP-1細(xì)胞電轉(zhuǎn)Cas9-gRNA-Puro-GFP質(zhì)粒時(shí)僅用1x10E6細(xì)胞就可以篩選得到穩(wěn)轉(zhuǎn)克隆并且成功進(jìn)行基因編輯。
THP-1這些細(xì)胞電轉(zhuǎn)mRNA, siRNA和 Cas9 RNP沒有細(xì)胞死亡的問題。如果可以不使用質(zhì)粒，電轉(zhuǎn)非常容易，效率接近100%并且細(xì)胞存活非常好。
我們的THP-1試劑盒對(duì)于Molm13和SUP-M2細(xì)胞的質(zhì)粒電轉(zhuǎn)幫助不大，我們?cè)诶^續(xù)研究其質(zhì)粒電轉(zhuǎn)方法。
小鼠的原代骨髓分離的單核細(xì)胞和造血干細(xì)胞非常特殊，不僅電轉(zhuǎn)質(zhì)粒后容易死亡，也會(huì)迅速降解mRNA和siRNA造成電轉(zhuǎn)不成功的假象。只要電轉(zhuǎn)液和mRNA和這些細(xì)胞接觸1分鐘，再轉(zhuǎn)移到其他細(xì)胞上電轉(zhuǎn)就會(huì)發(fā)現(xiàn)mRNA已經(jīng)完全降解。小鼠脾臟細(xì)胞也有降解mRNA和siRNA的特性。而小鼠腹腔的巨噬細(xì)胞雖然電轉(zhuǎn)質(zhì)粒后容易死亡，電轉(zhuǎn)mRNA卻沒有降解問題可以使實(shí)驗(yàn)順利進(jìn)行。
電轉(zhuǎn)實(shí)驗(yàn)中碰到特殊現(xiàn)象時(shí)，用戶可以發(fā)郵件向我們咨詢，我們可以提供其他實(shí)驗(yàn)方案供選擇。
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