每年的5月8號(hào)是“世界卵巢癌日”，根據(jù)世界衛(wèi)生組織國(guó)際癌癥研究機(jī)構(gòu)（IARC）發(fā)布的2020年全球癌癥發(fā)病數(shù)據(jù)報(bào)告顯示：2020年中國(guó)新發(fā)癌癥病例457萬(wàn)例，其中男性248萬(wàn)例，女性209萬(wàn)例，2020年中國(guó)癌癥死亡病例為300萬(wàn)例，其中男性182萬(wàn)例，女性118萬(wàn)例，在婦科三大腫瘤中卵巢癌的死亡率。

圖.2020年中國(guó)女性癌癥新發(fā)病例數(shù)類型

卵巢癌類器官（organoids）是指利用卵巢瘤細(xì)胞等在體外培養(yǎng)出的3D細(xì)胞培養(yǎng)物并具有一定的空間結(jié)構(gòu)組織類似物。卵巢癌類器官可以作為疾病模型，相較于傳統(tǒng)2D疾病模型，其在闡明疾病的發(fā)展、穩(wěn)態(tài)性和發(fā)病機(jī)理等與體內(nèi)環(huán)境更加接近，能作為卵巢癌治療、診斷和發(fā)病機(jī)制研究的理想試驗(yàn)?zāi)Ｐ汀?/span>

1、取材：標(biāo)本離體后，盡快取材。采用無(wú)菌器械，保證無(wú)菌環(huán)境，將腫瘤組織放入含有5 mL的原代組織保存液的 15 mL 離心管中，4℃轉(zhuǎn)運(yùn)。

2、清洗：在生物安全柜中取出樣品管，去除組織保存液，加入適量冷的添加有雙抗的 PBS，反復(fù)清洗后，去除 PBS。

3、重復(fù)清洗：重復(fù)第 2 步驟 3 次。

4、組織處理：去除 PBS緩沖液后，將組織塊移至10 cm含10 mL冷原代 組織保存液的無(wú)菌培養(yǎng)皿中，用無(wú)菌眼科顯微剪將組織剪碎（直徑約 0.5mm~1mm）。

5、重復(fù)清洗：使用常溫PBS，重復(fù)第2步驟3次。

6、收集組織碎片，加入組織消化液消化20~30 min，過(guò)70 μm篩網(wǎng)，收集卵巢癌細(xì)胞。

7、紅細(xì)胞裂解：加入10 mL紅細(xì)胞裂解緩沖液，室溫下在翹板搖床上搖10 min。

8、重復(fù)清洗：裂解完畢，使用常溫 DMEM/F12，重復(fù)第 2步驟3次。

9、類器官種板：調(diào)整細(xì)胞密度為2~3×106，與基質(zhì)膠1:1均勻混合，將細(xì)胞混懸液以40-60 uL每孔種在24孔板中，37℃放置15~30 min，加入預(yù)熱的類器官培養(yǎng)液，每個(gè)孔 750 uL。

10、類器官培養(yǎng)：將培養(yǎng)板放在 37℃  CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng),每2天更換培養(yǎng)液。加入培養(yǎng)液時(shí)，吸頭朝向側(cè)壁，緩慢加入。

11、類器官觀察：每天觀察類器官并拍照，了解初始類器官數(shù)量、增殖速 度、形態(tài)、微生物污染情況等。

圖.卵巢癌類器官不同周期培養(yǎng)結(jié)果（P為培養(yǎng)代次，d為培養(yǎng)時(shí)間）